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标题:[讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技”

黄花菜[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1.将配制好RPMI 1640培养基用量筒进行定量分装于盐水瓶中，定量的目的是便于使用时添加血清。
2.然后放至负20度保存，使用前放至室温下融化，然后过滤，再添加血清。
3.三个月内使用，中间不要反复冻融。
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

消化时我是先把培养液倒掉，然后用PBS洗两遍再倒掉，然后加胰酶。这样可以尽量减少血清对胰酶消化能力的影响
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
想请教两个问题：
1、原代神经胶质细胞培养时可不可以用0.25%Trysin-EDTA代替0.25%Trysin+0.1%胶原酶1型？
2、原代神经胶质细胞培养时需要用滤网过滤吗？用多少目的合适？
请有经验的群友不吝赐教！

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我养的是新生小鼠的原代神经胶质细胞,用的就是0.25%Trysin-EDTA,也有用滤网,用的是200目的.
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不仅想过，我还做了，所以才把它当一个经验。不过我做过的细胞毕竟种类有限，有的细胞行，有的不行，所以各人可以根据自己的细胞摸索一下。马上要过年了，这几天抓紧试试，难说能帮自己过个好年。上两天还看到有个站友要把细胞带回家里养呢，各种尝试都值得鼓励啊。

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请教一下，带回家里怎么养细胞啊？不能污染吗？
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S6044[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
推荐一个超净台除废液的小装置。

以前在国内时孤陋寡闻没见过，现在用的超净台都有这个装置，既方便快捷又使废液相对隔离，降低污染几率。

小瓶顶上的管子连出去是个小真空泵。大瓶里的废液定期倒掉并洗净，小瓶起缓冲作用，保护真空泵。铁盒里是高压过的一次性玻璃巴氏吸管作为吸头，也可用其他代替（pipet or tips）。

使用时安个吸头，开真空泵，enjoy it。

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谢谢分享，不过废液瓶放在超净台里有些占地方，看着不大舒服，不知是为了倒液方便还是其它用途~ 国内和现在的美国一实验室都是放在超净台外的地面上，预先倒入一些消毒液，只是吸液管通入超净台内。
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bongte[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下，带回家里怎么养细胞啊？不能污染吗？

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你可以看看这个贴子的讨论，哈哈
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=13587880&sty=3&keywords=%B4%F8%BB%D8%BC%D2')
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彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问有用过DMEM/F12的吗？本人新手，此前看园子里有人说这个培养基比较容易黄，可加HEPES或NaHCO3调一下，买之前问过销售人员，对方说已加HEPES，直接用就行，可是回来一加血清，颜色马上就黄了，用来养细胞也是，第二天颜色就比第一天黄，请问我需要再加点缓冲剂吗？另：我见到的别人都是在配制培养基的时候加，我买的是现成的液体培养基，如果要加HEPES或NaCHO3该怎么加？请高人指点一下，非常感谢！
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

养小鼠成纤维细胞一段时间了，在这和大家分享一下细胞传代中的消化的经说一点细胞消化的经验
1.我们一般用和胰酶共同消化，这样对细胞损伤相对较小，而且易消化下来。一般加一滴管酶，消化约20秒，就把酶吸掉了，然后让残存的酶继续消化约3分钟（不好把握的话，就在显微镜下观察，等细胞回收变圆时就可以了。）。这样一般不会消化过度，造成细胞死亡。
2.消化时的操作手法也很重要，一般时吹打两三次，然后转动培养瓶混匀冲洗，这样可以避免泡沫产生。
3.EDTA与胰酶合用，用的是0.25% 的胰酶和0.02%的
4.另外我是收集冲洗三四次，再用离心机离心的，个人觉得到细胞更好贴壁。（不离心的也做过，但贴壁没有离心的好，可能是EDTA影响吧！）
经验不足之处，希望大家指出。
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lagua123[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
养细胞有一段时间了，说说我们实验室的一些细节：
1、co2培养箱最底层放一容器加硫酸铜液体，还有在水浴锅里加适量硫酸铜液体，离心用的调节液体中也加适量的硫酸铜，都是为了除菌。
2、我们浙中大细胞室，一般上超净台时先用75%酒精擦一遍双手，然后点上酒精灯，开始准备实验用具。听浙大同学说他们做细胞都是戴上橡胶手套的。我们不戴，细胞污染的几率也是非常稀见的。
3、培养板我们实验室不用国产的，一般是用进口的好。这点是师兄提醒的。
4、在超净台上抽完培养液，一般要将新的培养液入小瓶子里在培养箱培养3天以上，看看有没污染。
5、还有我要对楼上的说一点看法，如果消化液里有加EDTA的，应该要加离心这步，有一次我样大鼠SMC时，用0.15%胰酶+0.02%EDTA消化，没有离心，细胞养几代状态很差。因为血清不能终止EDTA消化，残余EDTA会影响细胞贴壁。所以我建议离心这步。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问有养原代腹膜间皮细胞的吗，我养了2次都没细胞贴壁，请指教一下啊，多谢！
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