细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技”

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技”

阿敏[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74162
精华 0
积分 298
帖子 316
信誉分 100
可用分 2356
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-7
状态 离线
51
 
对细胞株有的时候血清多少并不直接影响细胞生长,血清质量也很重要,使用GIBCO胎牛血清和四季青的胎牛血清分别培养HepG2细胞,可能会认为不是同一细胞
(不过四季青的便宜,培养大多数细胞株也都还挺不错的)
————————————————————————————————————————————————————————————————
不过我个人来说,到还是比较认同增加血清的看法
就我个人养HEK293的经验看,这个细胞贴壁很慢,也很不牢固。由于要筛选稳转细胞,从一个细胞长起,慢慢扩大,每次扩大的原始细胞数目都很少,所以希望传代扩大的时候细胞尽可能多的活下来。
如果用10%的血清培养刚传代细胞,细胞贴壁要两天以上才完全铺展开,而且贴壁率不高,但如果我额外增加到30%的血清培养,原来不贴壁的细胞基本上都可以很快的贴壁。下一次换培养液的时候,直接换成10%或者5%的血清都没问题,照样活得很好。
顶部
dog002[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76386
精华 0
积分 916
帖子 1452
信誉分 100
可用分 8133
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-4
状态 离线
52
 

请教各位!我在六孔板上铺的细胞,细胞贴得可以,但培养液pH值上升很快很高,最后细胞不长都死了,试了几次都这样,但同时分得细胞在细胞培养瓶里好好的,大家有没有遇到这样情况?

我有如下疑问,希望对您有帮助:
1 您用的六孔板是新的吗?予试过吗?不同厂家的质量差别很大!
2 您用的是CO2细胞培养箱吗?箱内CO2浓度如何?检测过吗?我的经验是箱内CO2浓度一定要用专门的仪器进行测定。
3 CO2细胞培养箱的门没有关闭。

我也遇到这种情况,培养瓶里养的细胞好好的,可24孔板里养的细胞就不行,养着养着就开始死了,就变成半透明的那种。条件都一样,不知道什么原因造成的?
顶部
二丫头466[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74070
精华 0
积分 266
帖子 272
信誉分 100
可用分 2101
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
53
 

防止交叉污染,我们老师一再的强调。
听说现在细胞间的交叉污染很严重,所以如果一个实验室养两种以上的细胞的话就要小心咯……所需的用品最好分开用……
顶部
dongdongqiang[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79825
精华 1
积分 473
帖子 601
信誉分 102
可用分 3821
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-16
状态 离线
54
 

在细胞培养中,除了常规应该注意的问题,每个人都会有自己的“独门秘技”,不妨拿出来一起分享,一起讨论,一起提高。也不限于细胞培养,如果在其他实验中有什么“独门秘技”,也请拿出来分享。

我先来抛砖引玉,有的是老师教的经验,有些是网上学来的别人的经验,也有自己的心得,说得不对的,请大家指正:

1、不要等一瓶细胞培养液完全用完,才启用第二瓶。最好第一瓶还剩一点时,就启用第二瓶,如果第二瓶培养液有问题(如被污染),不致于毁掉你所有的细胞。
2、不要指望让自己的所有细胞“步调一致”,即在准备用来做实验的几瓶细胞较一致的同时,使另几瓶细胞量有多有少,以确保细胞不致于同时长过了死掉,或同时因瓶内细胞太少没长起来。
3、有时候经验上的“多少瓶细胞长多满能接种多少块培养板”,比细胞计算板来得更可靠,毕竟用细胞计算板计算其实夹杂了太多主观因素。
4、有时遇上长假,又不想把细胞都冻起来(毕竟重新复苏的细胞状态还是要差点),可以把吹打过细胞的吸管的头在新培养瓶的培养液中沾一下,继续培养,一般能保持一个星期以上没有问题。各人可以根据自己的细胞摸索一下。
5、关于胰酶消化贴壁细胞,其活力主要在于浓度。所以我消化细胞时喜欢在倒掉旧培养液后将培养瓶立起来几十秒,吸去流下的培养液,吸极少量胰酶润一润,再吸走,再吸入一点点胰酶消化,轻轻摆动培养瓶,让胰酶浸润到所有的细胞。我试过多种细胞,一般这样消化个一两分钟,就可以吹打了。一般1ml胰酶能消化2~3瓶细胞没问题,而且效果强于倒掉旧培养液后直接滴入1ml胰酶消化10分钟(毕竟倒掉旧培养液后瓶内不止残留1ml旧培养液,再入1ml胰酶,其浓度只有原来的一半)。这是我看到别人的经验后试了下,改了下,不全是我自己的。

欢迎大家参与讨论,有说得好的,请版主不要忘了举举小手手。
顶部
am10[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76183
精华 0
积分 676
帖子 971
信誉分 100
可用分 5735
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-2
状态 离线
55
 
我这周一(090302)进的细胞实验室,到今天整7天,从一无所知,到错误不断,犯了的时候我都不敢说,估计我养的那两瓶MG63早就污染了,到现在有了一点小体会。
1 超净工作台上的物品摆放要合适自己的习惯,取东西的时候老是十字交叉,极易污染,而且不便。但现在还没有找到合适我的方式。
2 一切开口瓶上方不要有东西飘过,可我就是不能避免。
3 吸走培养基的培养瓶我给躺着放(我想不然贴壁的细胞都下来了),后来被批了,极易污染,要立着放。
4 暂时不用的东东往远处放,我的周围都是器械,老觉得没有操作空间。
5 滴管把胶头的时候口儿要冲外,一开始我就冲着别人,被批!
6 一个字一定要记在心头——烧!

看了前辈们的经验收获很多!继续关注中~~~~
顶部
whitesheep[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 78856
精华 0
积分 825
帖子 1330
信誉分 100
可用分 7476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-4
状态 离线
56
 

标号要标到培养皿底部
顶部
pencil菲[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75646
精华 1
积分 410
帖子 476
信誉分 102
可用分 3191
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
57
 
上面大家说的都很好!
顶一个!
想问一个简单的问题
胰酶消化细胞
或者单细胞的生物
比如原生动物
可以把细胞完全消化死吗?
如果时间浓度足够的话
顶部
skytree[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76459
精华 0
积分 372
帖子 444
信誉分 100
可用分 3026
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
58
 
肯定能吧!
不死也是重伤了~
一般胰酶消化一分钟左右的就要终止消化了
我一般的做法是:在加入胰酶后轻轻敲打培养皿底部,加快细胞的收缩,时间差不多了就加入少量含血清的培养基终止消化,仔细吹打,细胞就基本上都能下来。
顶部
lagua123[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77374
精华 0
积分 437
帖子 533
信誉分 100
可用分 3511
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
59
 

看了大家的讨论,还有前辈们的个人经验总结,我觉得这个形势很好,希望有更多用经验的人来此发言,我是刚刚开始学习培养细胞,我们没有师兄师姐的经验可以拿来参考,但是,可以说,这个开拓养细胞道路的重任,我觉得还是有很多收获的吧。自己体会各种滋味,哪里有困难就往哪里钻。
顶部
leifengta[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77488
精华 0
积分 514
帖子 748
信誉分 100
可用分 4517
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
60
 

3 吸走培养基的培养瓶我给躺着放(我想不然贴壁的细胞都下来了),后来被批了,极易污染,要立着放?

请教高手是这样的吗?
顶部