[讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技” - 经验共享

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标题:[讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技”

HPLC使者[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的经验是：
黑胶虫一说纯属胡扯，绝不存在这样的生物
建议所有怀疑自己细胞感染了“黑胶虫”的筒子们都做个支原体检测，很简单设计两对引物做PCR就行。

3648755[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3 吸走培养基的培养瓶我给躺着放（我想不然贴壁的细胞都下来了），后来被批了，极易污染，要立着放？

请教高手是这样的吗？

===============================================

如果你的超净台风是从上往下吹的，那绝不能立着放
不要相信超净台的空气过滤器

一定要躺着放，它在培养箱里怎么放，在台子上就怎么放

谁批的你？

moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

因为我是在学习，带我做的学长批我，我就接受了，原来还有风向这个区别在里面啊！那我要再次请教一下我们实验室的大“牛”了，而且要确认一下风向。

近来又犯了一些错误，大家看看是不是哈！
1 细胞传代：一开始的是原代，传一次，标签是一代，不是二代。因为我想一传代不就是第二代了吗！后来说是这样分的，原代细胞，一代，二代~~~~~
2 老是紧张，手总是抖，一定不要怕！吸培养基的滴管不能碰到其他的东西，以免污染整瓶培养基。拿滴管的时候要四指握柄，大拇指摁胶头，这样会稳点。
3 传代时，加了胰酶后放到一边，进行下一瓶的换液，以提高实验的速度。因为有时候老师等那瓶消化，确实浪费时间，如果多的话，时间也不够用。
4 在熟悉操作步骤后，加快速度！

我只是做了细胞的复苏，换液，传代，其他的还没有接触过啊！后面的体验回继续总结的！

am10[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我交流一个经验，就是我们实验室在水浴锅旁边放了一打消毒小毛巾（也可以用小纱布代替），温育好的培养基拿出来之后就这个毛巾擦干，这样，避免把水浴锅的水（很容易有菌）带到细胞操作间去，另外这样也避免水流滴答的，把擦干后的培养基瓶子拿到细胞操作间，然后用酒精喷一下，就可以放到操净台上了！

junhun[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

5、关于胰酶消化贴壁细胞，其活力主要在于浓度。所以我消化细胞时喜欢在倒掉旧培养液后将培养瓶立起来几十秒，吸去流下的培养液，吸极少量胰酶润一润，再吸走，再吸入一点点胰酶消化，轻轻摆动培养瓶，让胰酶浸润到所有的细胞。我试过多种细胞，一般这样消化个一两分钟，就可以吹打了。一般1ml胰酶能消化2～3瓶细胞没问题，而且效果强于倒掉旧培养液后直接滴入1ml胰酶消化10分钟（毕竟倒掉旧培养液后瓶内不止残留1ml旧培养液，再入1ml胰酶，其浓度只有原来的一半）。这是我看到别人的经验后试了下，改了下，不全是我自己的。

看了前辈的经验本人受益匪浅，方法不错，准备下次试一下。养了1个多月的细胞每次传代都消化不好，今天传了两瓶（倒掉培养基，pbs冲洗两遍，1ml0.25%胰酶+0.02%EDTA消化1分30秒中止消化吹打）发现有大量的细胞没有消化下来，最后原来那瓶也没舍得扔加了培养基继续养不知道应该算哪代？

dragonkilly[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

前天第一次自己给细胞换液，因为怕污染，看到有说在酒精灯火焰上过一下瓶口根本没有杀菌效果，所以死劲地烧瓶口，忘记了培养瓶可是塑料的~~~结果瓶口被我烧变形了~~~（忘记了哲学老师曾经教导过我们：具体问题具体分析）自己第一次独立处理的细胞当然不舍得扔掉，当机立断，拿了新培养瓶，胰酶，准备消化了细胞换培养瓶继续培养，结果消化细胞时消化过度，随胰酶倒掉好些细胞~~~第二天早早地到实验室看我的细胞，发现被我折腾了半天的细胞长势还不错~~~心里一阵窃喜~~~今天中午到了实验室就发现培养基有点浑浊，心里一紧张，结果镜下看到杆状的黑色会动的不知道是何物的鬼东西~~~~~肯定是污染了~~~~~下午换液时加了抗生素，不知道还能不能救得回来~~~~我的第一次操作细胞，以失败告终，好生郁闷~~~~以后一定要潜心专研，关注细节，用心做事。。。
等有了经验再来分享。。。

66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如何判断培养的细胞长的好坏?在培养细胞时用倒置显微镜观察发现有结晶是什么原因？
谢谢！

plaa[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请教：
我培养的是骨髓瘤KM3细胞株，前一段时间状态尚可，成团，但细胞边界不是很清楚（相对我们实验室此细胞来说培养状态已算好了）。
昨日去看的时候发现4瓶细胞突然细胞单散，边界皱缩，好生惊奇和着急。仔细回想有什么可疑之处，唯一不同的就是我那瓶培养基用完了，昨天换液用的别人的，他的培养基只是颜色比我的稍红点(我们用的都是相同的培养基和血清,只是各自分），并且他的细胞没什么很大变化。
不知什么原因导致细胞状态突然变差，个人认为无菌操作应该没有问题。急需细胞做实验，毕业在即，心急如焚！请指教，谢谢！

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做实验一定要细心，严格按照要求做，还要多动脑子。我也要开始实验，准备培养细胞，希望顺利！

duoduo[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

说一点细胞消化的经验
1.用EDTA消化对细胞损伤相对较小，尤其是消化较过的时候，因为EDTA只针对细胞间的相互作用，而不针对蛋白。
2.消化时的操作手法也很重要，吹打应尽量轻柔，尽量避免泡沫产生
3.对于难消化的细胞可以EDTA与胰酶合用，比例需要模索

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轻柔很了总觉得吹打不均匀。。。

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