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标题:[讨论帖]起来分享大家在细胞培养中的“独门秘技”

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发表于 2012-2-22 14:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近在养MDA-231，细胞状态不好，总有很多圆形的细胞不贴壁，而且细胞生长也很慢。不知道咋回事呀。望高手多给点意见哈。谢谢
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缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每个实验室的条件很不相同，因此要选择适合自己的方法做，只要实验能做出结果来，有效就可以了啊！方法再好，条件不允许也是没辙啊！
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KGZ564[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教各位！我在六孔板上铺的细胞，细胞贴得可以，但培养液pH值上升很快很高，最后细胞不长都死了，试了几次都这样，但同时分得细胞在细胞培养瓶里好好的，大家有没有遇到这样情况？

提出一点自己的看法：
是否在细胞接种板时，接种密度过大，导致细胞生长所需的营养成分不够。
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

真高兴遇到这么多高人啊！
我做的是兔的胸主动脉的内皮细胞，用师姐交的方法，用铺盖针把血管翻过来，2型胶原酶37度消化15分钟，但是就是消化不下来细胞啊。加长消化时间到30分钟，还是不行，就是没有细胞。但是师姐说以前她们做的就是这样消化的。真不知道问题在哪儿。

各位高人，我还是个新手，请多多赐教啊！
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
很高兴能和大家一同学习一同进步
我有一小段经历与大家分享
我培养的是脂肪来源的干细胞(有同道中人,请与我多沟通),出现过几次细胞污染,弄的我很恼火,起初以为是培养液或操作的问题,可后来作了几次,还是污染. 后来找了好多专家分析,可能是我的实验动物出了问题,我养的是SD大鼠的脂肪细胞,有可能大鼠全身感染了支原体,起初,镜下培养皿内细胞周围及细胞上可见小黑点,越来越多,最后,变成了长条形,象小蚯蚓,这时,细胞生长特别慢,最终,培养液变浑浊,细胞逐渐死亡。
解决该问题的方法有：1、换动物。
2、如果细胞珍贵，可以用大环内脂类抗生素（如红霉素）或阿奇霉素进行抢救，“死马当活马医”，我救过来几次。
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guagua[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每个人所在实验室条件还有惯用的方法不一样，所以适合自己的就是好方法，大体套路一样，个中细节要自己体会。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的培养基用的是RPMI1640干粉配制的，以前没有调过PH，现在测pH居然是8.5，我是否需要调pH呢？能用盐酸调吗？不知道CO2能缓冲多少？请大家指教！
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cocacola[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞培养基如果PH偏碱可以拧开盖子在培养箱里放15~20分钟
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位前辈好，都说成纤维细胞好样，但是我养了一个多月了还是不成形。。。目前细胞形态基本是梭型，但体积很小，增值也慢，像请教下可能是什么问题，怎么解决？
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wsll[使用道具]
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发表于 2012-2-22 14:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看完了，发个言，
关于培养瓶横着放竖着放的问题，个人认为咋放都行，别管风向，我的超净台是垂直风，我的培养基是垂直放，一旦开盖，直到实验终点都不盖盖子，培养瓶横着竖着放都做过，过灯和不过灯都试过，从来没有污染，当然是有诀窍的：注意瓶口，病从口入，只要瓶口注意了，就不用怕！第一次培养的时候我用了快30根吸管，就因为不小心碰到了不该碰的地方，或者忘记了这根管是干什么呢，幸亏我当时高压的多，现在几根就够了。

一点感慨：下多大功夫，就收获多大；饭不好吃，只是因为没有做好！细胞不好，只因为没养好！
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