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看了那么多人都说了自己在细胞培养过程中的心得体会,我也说说我自己的,养细胞快半年了,从师姐、师兄那里学到了一些经验,自己也总结了一些,和大家分享一下:
1、放在四度的培养液、PBS、胰酶等在用之前,都需先放到超净台里照半个小时紫外,我们实验室都将这些东西装在玻璃瓶里,不用担心会被紫外破坏。这样既可以起到杀菌作用,又能让培养液、PBS等升至室温。
2、细胞间一般都会有大紫外,用来给细胞间杀菌,我们实验室大紫外的开关是设在细胞间外面的,所以,每次进去之前都要确定大紫外是否关了。有发生过没关大紫外就进去的情况,我有个同学,是另外一个实验室的,被照了两次,每次都照了超过一个小时,这对身体伤害是十分巨大的。还有就是开大紫外的时候一定要把日光灯给关了,否则,一是杀菌效果大减,二是万一没关大紫外进去,很难发现。
3、细胞间要定期大扫除,保持细胞间的清洁。
4、东西从超净台外面进入超净台都应该喷70%酒精消毒。
5、超净台里面的东西放置要符合自己的习惯,一切以安全,方便为原则。
6、条件好的实验室,手套用一次性的,要穿消毒的衣服。条件不够的实验室,手套可以重复使用,但是,每次都要照紫外杀菌后才能用,没有专门衣服的,最好带一个消毒好的袖套,这样也能减少染菌。
7、关于细胞消化,我用的方法和上面一位战友的差不多,就是将旧培养液倒掉之后,用PBS洗一次,然后加1mL胰酶,将全部细胞浸润后就将胰酶倒掉,这时,如果你不清楚消化时间,可以盖好盖子,拿到显微镜下观察,看到大部分细胞都变圆,细胞间隙逐渐清晰的时候,就说明消化完全了。这时,我们会用手握住瓶子,重拍两三下,细胞就都下来了,也就像前面一位战友说的“流沙状”。再加1mL培养液终止就好了。新的细胞一般最好镜检一下,消化几次后就会知道大致的时间,就可以省掉镜检这一步了。
8、养成好习惯,及时将染菌的细胞或者不要的细胞拿出细胞间,以免贻害无穷。
能想到的暂时只有这些,以后有再想到的再补充。欢迎大家积极讨论,分享大家细胞培养的经验