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标题:[求助]这个SKOV3怎么了?感觉在一层细沙上生长

pencil菲[使用道具]
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你的照片和描述不太清楚,细胞状态不好有小黑点还要和黑胶虫鉴别一下,丁香园上有很多关于黑胶虫的讨论,你可以看一下。如果细胞在培养瓶里长了1个月还没有传代,那细胞肯定会老化的,老化的细胞形态会发生一定的变化。我还是怀疑污染的可能性大一点。
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xingyi08[使用道具]
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我现在也在养SKOV3,暂时没有照片,感觉形态差不多,我也出现过这种情况,是污染了,你在高倍下看,这些细沙状的黑点动不动呢?
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大白菜[使用道具]
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你用的培养基是自己配的还是买的液体啊?
检查过培养基么?
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hold住[使用道具]
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可能是支原体污染 我现在和你遇到的问题很像 细胞突然之间就长成这样了 据说可以试试用环丙沙星 如果可以把黑点去掉 就可以确定是污染
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viviwang1987[使用道具]
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培养液是使用干粉配制的,使用之前都检测过的。

细沙状的黑点在高倍镜下好像也没有看到运动。 不过我的另一个帖子里面的7404 的是运动的黑点。

我不知道要怎么和黑胶虫来鉴别,我之前看了在论坛关于黑胶虫的帖子了,但是没有图片,很难辨别的。

支原体的话,可能是什么原因造成的呢? 之前看到论坛里有人说,血清内可能含有支原体,那时血清中很常见的,而且是无法透过滤膜来过滤的,如果真的是的话,我们就麻烦了,而且每次买来的血清都会因为批次不同而有影响,这样的话,该怎么办呢? 目前我们这里一般是使用杭州四季青的啊, 我听说过外国进口的血清也有出现过类似情况的。 所以实在是不知道该怎么办? 还有那里的血清的质量好一点的吗?
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viviwang1987[使用道具]
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可能是支原体污染 我现在和你遇到的问题很像 细胞突然之间就长成这样了 据说可以试试用环丙沙星 如果可以把黑点去掉 就可以确定是污染

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环丙沙星的剂量是多少? 会对一一般的肿瘤细胞有影响吗???你们使用的双抗是什么呢????多大浓度啊?
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viviwang1987[使用道具]
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我前一阵遭遇了一场污染,估计是培养液的问题,当时细胞本来很正常,后来发现镜下看到培养液中有一层细沙样的沉淀,移动培养瓶时可以看到像水中的沙子一样飘动,稍微晃一下有肉眼可见的白色细沙洋沉淀在瓶底,用PBS洗了两次可以了,可是次日又出现了,大概是第3天吧,高倍镜下可以观察到细胞核碎裂脱出(头1、2天看不出细胞的变化),后来就彻底不行了,而且可怕的是会影响到培养箱里的其他细胞的,你仔细观察一下,特别是细胞核,如果和我的情况很像,那就是污染了,赶紧把细胞扔了,绝对不要舍不得,原则上同一培养箱里所有细胞都要放弃,彻底灭菌的。我第一次就彻底灭菌了一次,后来误用了原来的培养液又有2瓶出现,第一时间扔了,还好目前其他细胞没有发现污染。一般这种污染培养液出问题的可能性稍大一点。当然,我还是希望你的细胞不要和我的悲惨经历一样,呵呵

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细胞已经扔了,因为已经坏死了,郁闷啊,情况和你说的很像,不过有没有白色沙洋沉淀,我就没有太留意,印象中没有看到培养液的混浊,而且情况的恶化早期不很明显,只是长的慢了,才引起我的注意,不够最近就看到镜下的细胞如图所示,变得有黑点,脏,就算换液也是当时好一点,第二天照旧,俄日且细胞变得很难消化下来。细胞慢慢裂解,惨不忍睹!

这个情况会影响别的细胞吗? 我的别的细胞生长好像也慢了,背景倒是没有细沙状,但是黑点似乎也很多……尤其是细胞核上,看到的总有黑点,然后细胞出现空泡,不知道是细胞老了,还是因为污染导致的细胞的变化。

请问你是怎样彻底灭菌的? 我说的是包括培养箱在内的所有的灭菌,希望可以分享一下,一般我只是使用75%的酒精来擦拭,或者喷培养箱和超净台,超净台实验之前还紫外消毒半小时……所有的清洗,消毒瓶子都是 我一手来操作,就是担心别人不认真,结果还是这样啊……
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qqq111[使用道具]
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我们学校基础和临床养细胞纷纷出现这种情况,曾经怀疑是血清的问题,但用同一个牌子的血清,人家有养的好的。据师姐说,用环丙沙星对细胞没有太大影响,估计和我们培养基中加双抗是一样的。我还没有尝试过,正准备尝试一下,量差不多每毫升1微克,你可以少量的尝试一下,我这也没有经验,只是一点建议而已,哈哈。双抗就是普通的青霉素和链霉素,浓度我记得是100单位每毫升吧,我们买的成品 所以我不是很确定。另外,我个人觉得如果黑点是动的 可能是细菌污染,如果不动,且细胞生长速度变慢,很可能是支原体感染。哎 我的细胞命运也很惨
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junjie05[使用道具]
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我们实验室的细胞也出现了这种状况,有黑点在下面,和楼主一样,非常的郁闷,希望各位高手给给指点啊,多谢了!
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yes4[使用道具]
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图片为4倍,背景清晰。

培养条件:McCoy’s 5A+10%FBS ,不含双抗。我的细胞包括原代培养一律不加双抗。血清就是国产的。


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2012-2-22 15:45
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