[求助]这个SKOV3怎么了？感觉在一层细沙上生长 - 经验共享

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标题:[求助]这个SKOV3怎么了？感觉在一层细沙上生长

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢楼上的朋友，请问还有放大倍数大些的照片吗？我想看清楚的还有细胞本身上有没有黑点，我看到买来的细胞上就有黑点，背景也是，所以我想知道这个细胞本来是什么样子的，你们的细胞上呢？

就像我发的照片的第三张就有看到在细胞的核上看到有黑点，不知道是原来就有的还是因为是污染就有的呢？？？？？

请楼上的朋友告知，谢谢了

gemei0115[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

上传的图片经过处理，原始图片较大，无法上传。
但是从原始图片中可以看出，细胞与细胞间隙是没有小黑点的，一个都没有。

培养的时候2-3天传代一次（1：3），增殖较快。我想起来了，培养液我写错了用的是McCoy’s 5A+10%FBS

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

因为没有做污染细菌的鉴定，所以不知道具体是哪种污染，当时配置的过氧乙酸把细胞室桌子、地面全部擦洗了一遍，差点没被熏死，眼泪鼻涕的，太惨了！！培养箱里的无菌水吸出来，用过氧乙酸擦一遍，又用75%酒精擦一遍，再按照培养箱消毒过程的说明执行一遍，重新放上无菌水。超净台也用过氧乙酸擦一遍，又用75%酒精擦一遍，整个超净台和细胞室紫外线照射2小时以上，所有重复使用的耗材（包括隔离衣）高压蒸汽灭菌，培养液、PBS重新配置，总之，可以想到的都折腾一遍，真是挺麻烦的。好像过氧乙酸时间长的话会对金属有一定腐蚀，所以金属的我一般都是再用酒精擦一遍，尽快晾干，记住水浴锅的水也要注意清洁，要常换，我现在一般也用灭菌水。
希望能够帮到你，祝好运！

nn255[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们也在养这种细胞，也出现了这种状况，我感觉是支原体污染，虽然细胞培养与培养液有关，可是以前我们公司的阿姨用DMEM也能养好，可是现在不知道怎么了会这样，培养也清晰，但也有细沙的感觉，不知道怎么办很急

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般情况下，细胞出现像你图片描述的样子，都要扔掉。

处理意见：
1. 支原体检测，两种方法：PCR法和DNA荧光法。
2. 细胞培养建议不加双抗。
3. 查找原因，主要3个方面：1）环境：多检查一下培养箱（水盘，滤膜）。超净台尽可能少放物品，彻底消毒。2）培养液：多检查血清，水质。3）操作。

我这里的细胞目前不在养，暂时手里没有高倍数的照片。

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细胞扔了，不仍也死了……
条件不允许做支原体检测

其他细胞也加双抗，但是没有影响，加是为了安心……
培养箱的滤膜，好像不久前换过，一般多久换一次？水盘使用的是超纯水，倒了旧的，一般会使用75%的酒精喷过，然后再接新的水……

实验前都会紫外消毒半小时以上……实验完都会酒精擦拭。

加入血清的培养液会现在干净的培养瓶内培养过，确认没有问题在使用，
水质要怎么检查？你说的是PH 吗？不需要吧？
看到网上有人说要使用饱和的硫酸铜来装载在水盘里，为什么，有什么作用？

cocacola[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的也是这个细胞，复苏以后不贴壁很多，然后长的很慢，和楼主差不多，也有过同样的情况，师姐说是支原体污染了，它的发现很慢，培养基也不浑浊，不过在高倍镜下可以看到那些黑色的东西有在动，建议扔掉吧，我已经扔了好多瓶了。

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

謝謝，看來我只能是從新買這個細胞了。
不过最近买回来的细胞不知道怎么了，来得当天看就看到细胞上有黑色的点,不知道这个是细胞正常的时候就会有的,还是因为细胞公司的细胞也有问题呢? 因为在ATCC 上找不到这个细胞的照片,别的一些照片的倍数或者背景颜色设置的关系，所以看的也不是很清楚，所以不知道你们能不能发一下这个细胞的照片呢?

还有就是一般你们买细胞是在什么地方购买? 那里的质量好一点,最近来得细胞,来得时候就看到背景上有一些很大,很奇形怪状的细胞了,总是让我觉得不安心.
谢谢各位了

wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好！我的SKOV3细胞出现了和你一模一样的问题，我想问问你，你后来是怎么解决的，我现在也是着急得很，细胞不长起来，没法往下做啊。先谢谢了！

viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-2-22 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你好！我的SKOV3细胞出现了和你一模一样的问题，我想问问你，你后来是怎么解决的，我现在也是着急得很，细胞不长起来，没法往下做啊。先谢谢了！

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使用了抗生素来清洗~~然后换了培养基，细胞长的很慢很慢~~每次换液都是用PBS冲洗~~~勉强靠着有两个细胞长起来的~~~过程很漫长~~~如果你是着急试验，最好找别人要~~~~或者还有库存就好就是重新复苏，我的是在是什么都没有了，只好那样~~~~说真的，细胞这样了，都不知道是什么原因导致的，最后也没有找到原因·~~所以用它来做的结果也不很可靠，还好最后我不是使用这个细胞做的后续试验~~~

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