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标题:[讨论帖]做树突状细胞的同行们请进

lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也做人外周血培养DC，24孔板，但感觉DC生长状态不太好，CD83表达率低。做流式时应用FS SS做图细胞分散，多颗粒的大细胞好象也粘附鼠同型对照，使阴性对照范围很大，阳性的细胞也显不来了。不知是什么原因，希望有经验的群友给予指导
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lixi559[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天又从外周血（直接从血站拿的浓缩白细胞）里分了一批monocytes，清洗的离心速度降到1000 rpm，在倒置显微镜下已经看不到杂细胞了；用流式测得纯度有78.84%。然后贴一下壁，洗一遍，消化下贴壁的细胞，再测它的纯度为81.25%。不知道这样的纯度是否合适？还请大家多多指教：）

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您好!不知您使用的浓缩白细胞是血站手工分离的还是机采的?这两种方法采的浓缩白细胞对分离DC有区别吗?初次分DC,望指教,谢谢!
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bluelake[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我要做大鼠的DC，取材是骨髓，谁测过MHC II 在DC的表达，我的邮箱

希望与大家交流

+++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++

我目前培养小鼠和大鼠DC,目前暂且培养良好,我做过流式,测过,不知道,你有什么问题?
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ending[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是做小鼠骨髓的DC,刚刚开始,不懂的地方很多,希望能多与大家沟通交流,我的qq是123956757
请大家帮我看看,给点意见
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=7474444&tpg=1&ppg=1&sty=1#7509597')
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的硕士课题是有关小鼠树突状细胞的，养了2年半的DC，有一定的经验和教训，而且为了培养DC，自己重组了rmGM-CSF，活性相当不错（经Nature上发表小鼠DC的作者试用，评价良好），如果各位有兴趣，讨论培养技术或需要rmGM-CSF的，都可来邮件商量探讨（我没有QQ，邮箱经常查看）。无论经费不足的，还是新手，如果有需要，可增rmGM-CSF5ug免费试用。
附我培养的DC：


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2012-2-24 14:07
12707483.jpg (21.88 KB)
 
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

附DC图2：


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2012-2-24 14:08
57574504.jpg (48.02 KB)
 
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再发一幅图（聚焦不好，请谅解）：


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jujuba[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
终于找到组织了， 请各位看看我养的DC的照片。

cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=9915049&sty=1&tpg=1&age=0')

明天就该收获了，想用胰酶消化下来，然后还要用流式分选，我们实验室里都没有人做过，请大家给我点建议吧。
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pengke1983[使用道具]
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发表于 2012-2-24 14:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家觉得PBMC贴壁后，悬浮细胞和贴壁细胞各占多少呢，是一半一半吗？DC培养七天后会增殖吗，感觉我自己培养的树突细胞数量没什么变化，吸吸洗洗的反而减少了。
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 小中大


QUOTE:
原帖由 pengke1983 于 2012-2-24 14:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

大家觉得PBMC贴壁后，悬浮细胞和贴壁细胞各占多少呢，是一半一半吗？DC培养七天后会增殖吗，感觉我自己培养的树突细胞数量没什么变化，吸吸洗洗的反而减少了。 ...

我是从骨髓单个核细胞培养的DC, 几天后感觉细胞总数是多了一些，但是不知道是不是因为DC传代了。
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