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标题:[讨论帖]做树突状细胞的同行们请进

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发表于 2012-2-24 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也做ＤＣ，请问国内哪里体外培养ＤＣ比较成功？
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发表于 2012-2-24 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你遇到和我相同的问题啊^^
你说的杂质是不是有很多比iDC小的细胞？我初步怀疑它们是血小板。。。
拿到monocytes后，用PBS洗时可以尝试减小离心速度（我用的1200 rpm，不过还得看具体的离心机^^）；即使这样做，虽然干净很多，但好像还是很难除净（也可能是我还没找到合适的速度）。。。导师建议我下次做的时候，先让monocytes贴壁4小时，然后洗去不贴的细胞，说不定会更好^^
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发表于 2012-2-24 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢你！我今天再看看，发现那些杂质形态不规则，好像细胞碎片，我想大概也是血小板之类的东西，下次我一定试试你的方法。不过我今天又发现了一个新的问题，我培养了两孔，但是有一孔好像污染掉了，早上看的时候还好好的，下午再看就什么也没有了，只有一片片针尖大小的小点，真是好事多磨啊，又没有人给我做指导，请问一下你们见到此情况没有？到底是怎么回事？有何解决方法？
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发表于 2012-2-24 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果是细菌污染的话，培养基会变浑；真菌污染的话，显微镜下会看到大量团状的东东；支原体污染的话，看不出来，只是细胞会长得不好，应该可以用某种染色的方法检测（不记得了^^）。这些都是导师说的，我运气好，还没碰到过^^
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xue258[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位好！我也是养DC的。从人外周血来源的单核诱导DC，养了两次都不成功，希望得到大家的帮助。我找了下原因：1.细胞杂质多，2.树突状形态不典型。急死人！
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viviwang1987[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

虚惊一场，可能是显微镜没有调好，今天看还好，碎片太多，看起来就像真菌污染！可能太紧张，有点风吹草动就着急！
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天又从外周血（直接从血站拿的浓缩白细胞）里分了一批monocytes，清洗的离心速度降到1000 rpm，在倒置显微镜下已经看不到杂细胞了；用流式测得纯度有78.84%。然后贴一下壁，洗一遍，消化下贴壁的细胞，再测它的纯度为81.25%。不知道这样的纯度是否合适？还请大家多多指教：）
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问一下，从浓缩白细胞里分出PBMC的步骤和直接从外周血分离一样吗？
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近看了一篇最初用外周血提取PBMC，然后在GM-CSF和IL-4的作用下诱导分化为成熟的DC的文章，他提到这样DC的纯度可达到60－80％，所以我觉得你那个纯度应该差不多吧！至于以后报道的纯度可达到95％以上，我不知道是不是真的！
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ha111[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我分离出小鼠骨髓细胞，用细胞因子诱导培养DC时遇到一个现象：我把细胞均匀分在24孔板里，几天培养下来，细胞数量没有明显增加，有些孔干脆就找不到细胞了。请问这是怎么回事？
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