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标题:[讨论帖]做树突状细胞的同行们请进

glass[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做了几例正常人的，20ML外周血养过10-14天后，镜下看细胞很漂亮，但是用10mL1640重悬后基本上数不出DC
1。上流式的细胞数说明上都有，我用的B&D公司的，是1*10^6个细胞20UL2。文献报道10ML可得到10^6DC，我没培养出来。
3。MLR一般作3个孔
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我暂时只做到流式。。。做DC的成熟测定。
我不知道你有没有在显微镜下看过24孔板里的细胞。如果太浓的话，细胞层叠非常严重，会导致营养不良。 我以前曾用两倍于现在的密度养过，感觉收获的细胞反而不如现在的多。
因子和你用的一样，不过我都用的 50 ng/mL。第一次换液是在第三天，其他是隔两天，每次都是半量替换。
订血是以学校的名义订的，还得开证明什么的~ 个人肯定不行。
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pencil菲[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是养小鼠DC的，目前GM-CSF还没有到，但试验处于进行中，试剂需要得比较急，不知哪位同仁有富余试剂可购买，不甚感激！
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toy[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
对不起，好久没有来看了，试验也停了好一段时间了！来了也总是忘了要把这篇文章带过来。不管怎样，我今天带来了，希望能弥补一下！
title : Proliferating Dendritic Cell Progenitors in Human Blood
autheror:Romani N
J.Exp.Med 1994,180:83-93
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yhz1973[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我是从人外周血分离、扩增DC，文献报道成熟DC悬浮生长，但我培养的DC却大部分贴壁生长，不知为什么？
在鉴别成熟DC时，我用的是FITC-80，83，86标记，流式细胞仪检测，结果80表达偏低，83几乎不表达，这是为什么?
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glass[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是从外周血分离、诱导扩增DC，但都是悬浮生长的，有时候有簇集现象，我不知道你能否确定你得到的细胞就是DC,有典型的树枝状突起吗？
至于成熟的监测，我还没有做过，我想如果是正常人来源的DC,成熟后一定不会不表达CD83，这可是DC成熟的主要标志啊！
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glass[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为试验对DC分离、纯化的要求很高，所以最近我们想采用磁珠的方法分离培养人DC，希望能和有经验或者有经历的同行交流交流！
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发表于 2012-2-24 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近在培养未成熟DC细胞，我的方案是从脐带血中分离单核细胞，GM-CSF和IL-4诱导分化，但是做了很多次结果都不理想，主要是CD1a的表达率太低（30%左右），而且培养的细胞背景不是很干净，总是混的有一些小碎片（可能是细胞崩解的碎片或者血小板）。大家在培养DC过程中用的细胞因子的量和比率是多少，培养基是什么，如何在分离MNC的过程中避免血小板的混入？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家在细胞换液时是全量换液、半量换液还是半量添加呢？我是半量添加的，但是感觉细胞开始增值还比较明显，后来就长得很慢了，而且有很多细胞萎缩、有一些细胞偏蓝，很圆，内部有活动的小点，不知道是什么东西，污染吗？
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DDD[使用道具]
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发表于 2012-2-24 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也是做dc的，上2周刚完成了dc的培养，不是很理想，好多瓶的细胞不纯，其它的杂质细胞太多，很快决定再养一批，不过养这个细胞，确实是有点贵呀。
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