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标题:[求助]做细胞融合,为何融合率不高?

yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对于有碎片的问题，从你描述的看，你可以先判断培养基是否有问题（无论是有血清的还是没有），肉眼观察就行。再就是你所说的转速和时间问题，你的离心机的半径如果大的话，可能低转速也能造成大的离心力，从而破坏细胞，离心力可以控制在500g左右试试。还有就是时间的问题没有必要到10分钟，你可以减半。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上的各位，下个月又要融合了，我按大家的建议，改进一下方法，看看结果怎样。
离心的时间要减半的话，我怕淋巴细胞离不下来。
而且用吸管把细胞团弄散，会不会把已经融在一起的脾细胞和杂交瘤细胞又吹开？
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
离心的时间要减半的话，我怕淋巴细胞离不下来。
而且用吸管把细胞团弄散，会不会把已经融在一起的脾细胞和杂交瘤细胞又吹开？

对于你的担心，我是可以理解的。时间减半是在离心力达到一定的情况下缩短的，这样比较不容易损害细胞。而对于融在一起又吹开的问题，你要这样理解，如果是一团的话，单靠你的PEG的渗透而作用于团里面的细胞是不可能的。所以你要让团散开能充分的发挥PEG的作用，而且上面已经提到让PEG作用一段时间再去终止。
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wmp1234[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我发现有的人做融合时，在事先配好的PEG中加入DMSO，我不明白为什么要加DMSO，对细胞没有副作用吗？
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HP007[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这边试过用含DMSO的PEG来融合，结果基本上融合率不高，换回不含的以后融合率又正常起来了
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fsdd817[使用道具]
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发表于 2012-2-24 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也做过几次融合，我们实验室的方法是：制备的骨髓瘤细胞与脾细胞1000rpm离心10min，倒掉上清并要充分弃净，用酒精棉球吸去剩余上清，以免影响PEG的作用。将融合管置于手掌中，轻轻振荡底部，使两种细胞充分混匀。用吸管将1ml 37℃预热的PEG在42-45s内匀速滴加到融合管中，边加边轻轻摇匀，立即滴加37℃预热的基础培养基DMEM(事先准备好)，使PEG稀释而失去作用，具体做法是用吸管在第1分钟内加1ml预热的基础培养基，遵循先慢后快的原则，后面慢慢提高速度。
总体融合率可以达到90%以上。楼主可以参考下。
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