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标题:[分享帖]细胞培养常见问题及回答

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发表于 2012-2-26 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
21.PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之间有什么差别？

PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白质的单克隆抗体生产培养基。如果作为杂交瘤生产培养基使用，PFHM-II可能需要补充低水平的血清。HYBRIDOMA-SFM即是杂交瘤生产培养基，也是单克隆抗体生产培养基。它包含低水平的蛋白质。
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发表于 2012-2-26 12:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
22.在High Five无血清培养基中去污剂的浓度是多少？

High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
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发表于 2012-2-27 12:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
23.High Five细胞用多大的密度冻存？

3.0x10E6 cells/ml
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发表于 2012-2-27 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
24.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的细胞有害吗？

可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓度比典型的2mM高6倍。酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会有不利的影响。
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发表于 2012-2-27 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
25.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？

我们强力推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性最小，生活力最高。正如手册上所显示，通过使用巴氏德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。
胰酶消化一个T25瓶的sf9细胞：
1. 去除培养基。
2. 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS.
3. 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。
4. 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。
5. 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）
6. 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。
7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。
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发表于 2012-2-27 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
26.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？

为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。
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发表于 2012-2-27 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
27.如何评估ES细胞合格的胎牛血清？

使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。
相关生长效率分析：
当ES细胞以非常低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持ES细胞克隆的能力。
细胞毒分析：
当以非常低的密度传入包含30％胎牛血清的生长培养基中，检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。
相关形态学和分化分析：
检测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，丰满，颜色较浅。
所有的分析在没有ESGRO的情况下进行的，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。）
经过培养发现，大约8批中有1批可以用来培养ES细胞。
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发表于 2012-2-27 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
28.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？

通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。
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发表于 2012-2-27 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

血清没有特殊需要，是不应该热灭活的。
请参考cuturl('http://www.dxy.cn/portal/article/4/20/189/1706.html')
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发表于 2012-2-27 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
常用肿瘤细胞株
细胞株
详细描述
种属
培养条件
价格


SGC—7901



中分化胃腺癌



人



10%FBS RPMI1640

400


BGC—823



低分化胃腺癌



人



10%FBS RPMI1640

400


K562



慢性髓原白血病



人



10%FBS RPMI1640

400


HL—60



原髓细胞白血病



人



10%FBS RPMI1640

400


NB4



早幼粒白血病细胞株



人



10%FBS RPMI1640

400


RAW 264.7



巨噬细胞（瘤）



小鼠



10%FBS 高糖DMEM

800


SVAREC



大鼠动脉内皮细胞



大鼠



10%FBS RPMI1640

800


Hela



人宫颈癌



人



10%FBS DMEM

400


MC



大鼠肾小球系膜细胞



大鼠



10%FBS DMEM（低糖或高糖）

500


PC



嗜铬细胞瘤





400


H22



肝癌细胞株



小鼠



400


RPMI8226



多发性骨髓瘤



人



10%FBS RPMI1640

800


MC 3T3—E1



胚胎成骨（成纤维）细胞



小鼠



α—MEM

800


HEK293



人胚肾细胞（加拿大）



人



1000


A549



人肺癌细胞（ATCC）



人



1000


PA317







10%FBS 低糖 DMEM

500


NCI—N87



人类胃癌细胞系



人



含4500mg/l葡萄糖、丙酮酸钠、10%FBS RPMI1640

800


IEC—6



大鼠小肠隐窝上皮细胞



大鼠



0.1u/ml胰岛素10%FBS 高糖DMEM
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