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标题:[求助]请高手帮忙看看细胞是不是支原体污染？

vera+[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
拉丝可能是细胞接近死亡或状态不好时的凋谢产物，如果细胞大面积脱落，可能是细胞传代过多状态不好所致，也可能是长时间不换液或密度过大所致，但加上染色中出现的结果看来，细胞更像是感染了霉菌，以前我也出现过这种情况，是霉菌感染的结果。
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得不是霉菌污染，细胞培养至出现明显黑色颗粒到现在基本有一个月了，细胞生长速度完全没受影响，只是状态不佳，也没在培养基中看到纵横交错的菌丝，若是霉菌污染，细胞现在早该死掉了。
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49888[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好像是支原体污染
具体请看这个web site
cuturl('http://www.bioon.com/experiment/faq/80858.shtml')
不过最终确定，你需要买一个支原体检测试剂盒，我们实验室以前用过一个，好像还不错，就是做个PCR就好了，也有一些防治支原体的药有得卖，我记得精美就有，可以试试。


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2012-3-7 16:06
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
恩，我这两天在做PCR检测，结果若也是阳性，基本肯定了。

不知对于支原体消除大家有什么比较有效的建议，象BM-Cyclin、Plasmocin如何？我用过环丙10ug/ml，效果不佳。

另外，抗生素能彻底消除支原体吗？
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的细胞目前也出现类似的黑色小颗粒，请问楼主你说的黑色小颗粒在低倍镜（40倍）能看的见吗？我培养基的黑色小颗粒在40倍就能看到，200倍观察发现做布郎运动，细胞内部也有（主要在核周围），基本上不影响细胞生长。但是传代或刺激（例如转染）的时候会出现很多。
我有以下观点跟楼主商榷：
1.支原体在光学显微镜下看不到吧，40倍光镜能看到支原体吗？
2.细胞内部也有，在细胞死亡的时候（例如转染，传代等刺激）培养基里黑色小颗粒会多一点出现。我怀疑是细胞裂解产生的颗粒。
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发表于 2012-3-7 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按理讲支原体是不可见的，所以通常都是染DNA后在荧光显微镜下观察细胞核外是否有荧光。当然，如果要确定，最好还是用检测试剂盒看看。
小黑点我也不知道是什么东西，我曾经观察到在用胰酶消化细胞的时候，有细胞破裂，细胞内释放出很多小黑点样的东西。但是奇怪的是我用防治支原体的药处理一段时间后，细胞明显变得“干净”很多，细胞内和细胞外的小黑点都明显降低了。
但是这些小黑点是什么呢？
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8964357[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
通常不推荐使用抗生素，因为容易产生抗药性，然后你的细胞做的实验结果就会被质疑。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
按照常理，支原体在光镜下是不能被观察到的，我的细胞现在低倍镜下能看到小黑点，高倍镜下能观察到黑店的布朗运动，荧光染色在细胞表面及细胞间可见荧光小点，PCR检测培养上清做膜板阴性，想抽提DNA试试。
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summerxx[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用了抗生素（环丙）没见明显改善，不用细胞结果也会收到质疑，既然如此还是用吧，顺便可以进一步确定是否是支原体污染
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2012-3-7 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我认为仅凭DAPI染色不能确定是支原体污染,你换液时多用PBS(或者培养基)冲几遍,我的细胞传代的时候会出现黑色小颗粒,但过夜PBS冲洗换液后就基本上没有了，也没长起来.
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