细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]请高手帮忙看看细胞是不是支原体污染?

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[求助]请高手帮忙看看细胞是不是支原体污染?

summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
21
 
再传一张照片供大家看看,帮忙顶顶!


查看积分策略说明
附件
2012-3-7 16:09
16728672.snap.jpg (56.38 KB)
 
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
22
 
我觉得这张很典型,大虾帮忙分析一下


查看积分策略说明
附件
2012-3-7 16:09
95232215.snap.jpg (20.89 KB)
 
顶部
ritou1985[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77664
精华 0
积分 644
帖子 948
信誉分 100
可用分 5596
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-19
状态 离线
23
 
支原体的问题是比较复杂,通常没有经验的人很难判断。
我建议你看看我上面给的链接以及那个网页内部的链接,那里面有不少有用的知识可供大家一起研究,学习和探讨。至于确定支原体污染,我觉得PCR的方法还是比较可信的,你要不放心,可以再做几次,同时一定做好正、负对照。
感觉你的DAPI染色的细胞还是蛮像是支原体污染。“若有支原体污染,在Vero细胞核外与细胞表面会出现蓝色萤光小点或是丝状点。其形状一致,与细胞残片染成之不规则点状物不同。”这个是那个网站上的原话。
顶部
101010[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75120
精华 0
积分 517
帖子 734
信誉分 100
可用分 4490
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
24
 
我用过Plasmocin 来杀支原体,细胞传的尽量稀,用25μg/ml的浓度处理2周,情况会有明显的好转,但是完全杀灭很难,还需要挑单克隆,得到没有污染的细胞,但是从你的图片看,不怎么象支原体污染,可能是你DAPI浓度太高,产生的非特异的细胞质着色。
顶部
newway[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76575
精华 0
积分 505
帖子 689
信誉分 100
可用分 4253
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
25
 
我也遇到这种情况,我们这的老专家说这是血清中的黑胶虫,不太好去掉
顶部
S6044[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75117
精华 0
积分 559
帖子 797
信誉分 100
可用分 4821
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
26
 

回复 #25 newway 的帖子

一年以前,我们实验室的细胞也出现这种情况,一直没有办法根除,上网检索的结果基本确定为黑胶虫。最后几乎所有的细胞都被污染,很是痛心...
楼主可在园子里,以“黑胶虫”为关键词检索参考。
另外还有如下的情况供参考:
1)血清浓度很低,甚至无血清时,平板很快就被铺满,甚至出现絮状的东东,细胞玩完;
2)消化细胞时,用低浓度的胰酶可以在细胞未脱落时洗掉一部分,换液频繁一点时,可以遏制一定程度不能除掉;
3)建议楼主仔细排查实验的每一环节,特别是配制培养基的用水等细节,因为我们后来从上海、北京引来的细胞在换用我们的培养基传代几次之后也出现类似情况;
4)刚开始用过一段时间的大扶康注射液(用量记不太清了,不好意思),有点儿效果但不是很理想;
5)个人感觉,夏天,可能是空气湿度太大的原因,细胞的状态普遍不是很好,容易出现问题。
关注此帖,祝楼主好运。有好消息,别忘了及时分享:)
顶部
气泡[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77464
精华 0
积分 258
帖子 236
信誉分 100
可用分 1946
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
27
 
有可能是支原体污染,也有可能是血清里的微生物影响
你可以换一批血清试试!
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
28
 

现在大家意见主要分两种:支原体或者“黑胶虫”,我倾向前者,目前黑胶虫没有确切的定义,检测和处理方式,我只能先按支原体处理,安排检测和治疗同步进行:
PCR检测支原体,尽可能抽提DNA作为膜板;
定购了BM-Cyclin和Plasmocin,到货后准备分别加药做对照

大家还有什么好的建议,请与我分享,谢啦!
顶部
baidukk[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77444
精华 0
积分 803
帖子 1226
信誉分 100
可用分 7048
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
29
 

支原体很小,肉眼看不到的,检测支原体污染,可以用支原体检测试剂盒,我们实验室就有自己研发的这种试剂盒,我们自己都用的,每次冻存细胞之前都会检测一下,也对外销售,有需要可以联系我哦,我可不是做广告啊,偶是研三的学生。
如果污染了,可以用专门灭支源体的东东加进培养液杀,不过需要一段时间才能完全消灭,不过因为我没污染过,亲自没用过,不过我看实验室有人再用,好像一个月左右就可以了。不过据说灭过支原体的细胞今后也很容易复发的……
顶部
summerxx[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75852
精华 0
积分 885
帖子 1388
信誉分 101
可用分 7783
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-28
状态 离线
30
 
你们实验室用的是什么试剂盒?
顶部