小中大各为高手,请教一下,本人做人外周血单个核细胞的IL-17,也是由于流式仪使用时间的限制,要在刺激,阻断后,第二天,才能检测,我在坛子里看到有前辈建议“对于6小时的protocol,一般采用较多的是在刺激2小时后加入BFA 和Monensin来阻断高尔基体功能,刺激因子的表达,使合成的Intracellular Cytokine能留在细胞内部分必到细胞外,才可以由经Intracellular Cytokine Staining检测到。
阻断后再培养4小时可以把细胞放进4度冰箱留待染色用。 ”
我有一点不明白,(阻断后再培养4小时可以把细胞放进4度冰箱留待染色用),是带着刺激,阻断剂一起就放在冰箱里,不需要离心,清洗等处理后再4度保存吗?在保存的时间里,刺激,阻断剂不会对细胞造成影响吗?
问题比较傻,请大家不吝赐教,谢谢
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不要放在4度冰箱。可以把胞外染上,然后固定穿膜,染上胞内放四度过夜,次日再检测。如果时间实在来不及至少要染上胞外后固定过夜。