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标题:[讨论帖]免疫细胞或组织化学染色的相关问题

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QUOTE:
原帖由 jkobn 于 2012-3-13 12:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
加了过氧化氢后会对实验结果有影响吗?会是也本阳性的结果变成阴性吗?

过氧化氢可以减少非特异性着色,也就是背底深,但是你的没有结果,所以这一步的影响不大!
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jkobn[使用道具]
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是否要把固定液换成丙酮??
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回复 #92 jkobn 的帖子

可以试试,丙酮可以使抗原沉淀,而多聚使之胶联!
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milkdog[使用道具]
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你好!我正在做细胞爬片的免疫组化,基本步骤如下:
1.用95%的乙醇固定30min,
2.PBS洗2‐3次,
3.加入3%H2O2 15分钟
以后各步与 你所说的相同,但
没有阳性结果,
请指教
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QUOTE:
原帖由 milkdog 于 2012-3-13 12:55 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
你好!我正在做细胞爬片的免疫组化,基本步骤如下:
1.用95%的乙醇固定30min,
2.PBS洗2‐3次,
3.加入3%H2O2 15分钟
以后各步与 你所说的相同,但
没有阳性结果,
请指教 ...

所标记的是胞浆,核还是膜?
前两种的话要用triton。
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milkdog[使用道具]
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请问,triton 什么时候用,怎样用呢?我急需使用方法,谢谢!
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这些天来我把固定液换成了丙酮,发现丙酮对细胞的形态影响比较大,细胞都皱缩变形了,而且同样还是没有阳性的结果,我用DAB或者是AEC染色时间都很久,并不象有些说明书上写的几分钟就可以显色,有时候我把显色时间延长到半个小时,或者一个小时都毫无反应。希望能继续指点。
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园丁##[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 milkdog 于 2012-3-13 12:57 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问,triton 什么时候用,怎样用呢?我急需使用方法,谢谢!

血清封闭之前就可以用!
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请问:我想自己配置铺片用的PLL,浓度是多少?对PLL的分子量由要求吗?多谢!
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windy+++[使用道具]
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我正在做人肝癌细胞的甲胎蛋白免疫组化实验,结果在胞核和胞浆中都显色,而抗体说明书上说阳性部位是细胞浆,出现该现象的原因?我的阴性对照也有轻微着色,请教原因?
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