细胞世界

细胞还可以，但是组织切片的最好还是酒精脱水。这样的观察结果会好一些！

染色完后，组织有大量的水分，如去掉则严重影响结果的观察！基本步骤是（供参考）：
a）室温彻底凉干切片（2h以上，但是这只是凉干组织表面的水分，细胞间隙可能还有残留）；
b）逐级酒精脱（见上），以去除残留水分；
c）二甲苯2X10min，以去除无用的有机物；
d）中性树脂（组织切片）或50％明胶（细胞）封片。

应该不是PLL的原因，我的细胞免疫化学染色都用PLL铺片，没有您的这种现象。
造成的原因可能是：
a）封片剂问题
b）显微镜问题

您可以在封片之前先在显微镜下看看，以排除a）
看看其他人的片子，以排除b）

上述组化步鄹是组织切片的，而对培养的细胞则比较简单：（细胞最好种在玻片上）

1。固定液固定10－30min，0.01MPBS清洗2min×3；

2。羊血清封闭液封闭（可以加入0.3% Triton X100 ）30－60min分钟；

3。加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g＋30% Triton X100 1ml）稀释的第一抗体室温反应1－2h或4℃过夜。吸去抗体，0.01MPBS洗2min×3；

4。加入血清稀释液或0.01MPBS稀释的二抗，室温孵育1h。吸去二抗，0.01MPBS洗2min×3；（如果是荧光二抗就可以直接用50％甘油封片，进行观察了）

5。加入ABC复合物，室温孵育1h，0.01MPBS洗2min×3，蒸馏水迅速冲三次；

6。加入硫酸镍铵溶液（DAB 25mg＋蒸馏水50ml＋硫酸镍铵醋酸缓冲液50ml＋葡萄糖200mg＋氯化铵40mg＋葡萄糖氧化酶1mg），进行免疫细胞化学显色，时间不超过30min。不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MPBS终止反应；

或直接加入配好的DAB溶液进行显色。

7。梯度酒精（70％、80％、90％酒精5min×1，95％酒精5min×2，100％酒精5min×3）脱水之后，50％明胶封片。

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你好：
我马上要做细胞免疫化学实验，在这里请教几个问题 1：细胞爬片免疫组化的单抗能否使用做组织切片免疫组化染色的单抗代替。为什么？2：盖玻片是否需要使用粘片剂，如果需要，如何消毒灭菌。 谢谢！

我马上要做细胞免疫化学实验，在这里请教几个问题 1：细胞爬片免疫组化的单抗能否使用做组织切片免疫组化染色的单抗代替。为什么？2：盖玻片是否需要使用粘片剂，如果需要，如何消毒灭菌。 谢谢！

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1：应该是可以的。组织细胞的抗原和培养细胞的抗原虽然肯定有区别，但是大多数情况下是一致的！
2：盖玻片泡酸24h－48h，冲洗干净，高压蒸汽灭菌。

请问主任，如果把羊血清换成其他的例如马或牛血清，效果如何？对封闭有什么影响吗？谢谢

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虽然可以，但都没有羊血清的效果好。好像是羊血清中的抗体可以和多种抗原结合的缘故！