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我作免疫组化的步骤是:
1.切片二甲苯脱腊(经三道二甲苯脱),然后不同浓度酒精(95%,75%,52%)脱水后,自来水冲洗,然后蒸馏水漂洗,(一般脱腊至水时间每次5分钟).
2.加过氧化氢,10分钟,PBS漂洗.
3.抗原修复:此步在免疫组化中相当关键,有两种方法1),加热修复:把片子放入水浴中煮沸,15分钟(2)酶修复:滴加酶液(成分为:胰酶缓冲液:胰酶溶解液为3:1)于片子上,37度孵育,15分钟, 至于什么抗体用什么方法修复,根据经验,然后PBS漂洗.
4.加非免疫血清于玻片上,室温下20分钟(注意:此步结束后不用PBS漂洗).
5.讲片子用吸水纸将标本周围液体擦干,滴加一抗,(滴加时标本不可干燥)然后4度过夜.
6.PBS漂洗,甩干,加二抗,37度孵育15分钟.
7.PBS漂洗,滴加SP,37度,15分钟.
8.PBS漂洗,加底物显色.
9.定位:苏木素复染(30秒),自来水漂洗,0.1%HCL分化;40度水浴蓝化(1-2分钟)
10.若显色底物为DAB,则片子需要经酒精脱水处理(无水乙醇浸泡4-5分钟);若显色底物为AEC,则片子不要经酒精脱水.
11.中性树胶封片,常温下保存组织切片.
