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标题:[讨论帖]免疫细胞或组织化学染色的相关问题

园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
快要做细胞免疫组化，请大家帮一下。看了大家那么多帖子，提到细胞爬片要用多聚赖氨酸包被，可否那位肯把具体的多聚赖氨酸处理步骤说一说呢？前面有位同学已经说过了，可惜比较笼统，能不能再具体点，最好把时间具体一下好么，处理多长时间，盖玻片怎么烘干，没有专门的架子啊，如果放在纸上烘干，会不会弄得很脏？，可不可以放在纸上超净台晾干呢？？放在超净台上开风机吗？前面有战友问过此问题，我们一起感谢大家的回答。THANKS

____________________________________________________________________

玻片的清洗就不赘述了
我们是用多聚赖氨酸稀释5-10倍
然后滴一滴（50微升）到一张玻片上
然后把另外一张玻片按压到滴过多聚赖氨酸的玻片上
两张切片有2/3的区域重合，另外1/3的区域是手操作区域

可以把实验台擦干净，然后把这些玻片放置到桌上晾干即可，上面可用一张纸覆盖
无需在超净台晾干，因为不需要无菌。
实验室本身就比较干净
我们曾经放置到细胞培养箱中烘干

烘干后
两张片子自动分离
同时多聚赖氨酸比较均匀
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好，请教你，我要验证一种蛋白是否能黏附肝细胞，用细胞组化可以检测吗？细胞爬片后我加了蛋白，然后就固定染色就行了吗？

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个人认为不行
因为组化并不能说明你的蛋白黏附到肝细胞上
应该做电镜吧

免疫组化只是平面图像
不能反映你的蛋白是在表面还是在内部

假定这种蛋白的受体存在于细胞膜并经免疫组化证实
1、再加上电镜，也许可以达到你的目的
2、做这种蛋白和蛋白受体的免疫组化双染色，也许效果很好，而且比电镜便宜。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢
昨天不小心把消化液的次数重复了，笔误，不好意思。
一、一抗浓度调整为1：600、并且4度过夜，后仍然会有细胞核着色的问题，且比较多；而说明书上建议的浓度范围为1：50—1：500。
二、资料显示心肌游离脂肪酸结合蛋白H—FABP是一种胞浆蛋白，不知道您有没有它在细胞核表达的资料？
明天我全部用PBS清洗、再问问公司吧，多谢多谢
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢
昨天不小心把消化液的次数重复了，笔误，不好意思。
一、一抗浓度调整为1：600、并且4度过夜，后仍然会有细胞核着色的问题，且比较多；而说明书上建议的浓度范围为1：50—1：500。
二、资料显示心肌游离脂肪酸结合蛋白H—FABP是一种胞浆蛋白，不知道您有没有它在细胞核表达的资料？
明天我全部用PBS清洗、再问问公司吧，多谢多谢

++++++++++++++++++++

如果把二抗稀释呢？
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发表于 2012-3-13 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，一口气读完了所有回帖，真是受益非浅啊。
我想问个问题，细胞膜表面的抗体做出的阳性结果是不是应该胞膜上的一圈呢？
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发表于 2012-3-13 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下,我做的细胞是双抗,我一抗(1:100)4度过夜(约16小时),室温平衡20分钟,再二抗(1:50)37度45分钟. 二抗中的FITC最后显色的颜色始终偏黄,其他颜色都很好,请问是什么问题?

之前我有试着加入0.1%曲立通37度孵10分钟,后又3%双氧水37度孵10分钟,但是细胞出来后变形,且有点自融的感觉.然后我就取消这两步了,请问是什么原因
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发表于 2012-3-13 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一个很现实的问题，如何能防止液体弥散开，流的到处都是，甚至造成干片？
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wood533[使用道具]
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发表于 2012-3-13 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

您好：我是湘雅二医院骨科研究生，近期准备做骨肉瘤石蜡切片免疫组化实验，有个问题请教您：

做预实验确定一抗最佳浓度时，（公司推荐浓度时1:50），我打算将抗体稀释成1:25 1:50 1:100 1:200.这种稀释范围可行吗？ 不同抗体浓度的预实验是同时做还是分开做? 若同时做能同时在显微镜下观察染色效果吗？ 谢谢！
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