细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]免疫细胞或组织化学染色的相关问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]免疫细胞或组织化学染色的相关问题

园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
31
 

Q:30% Triton X100 和0.3% Triton X100 配好后可以室温放置吗,还是需要现用现配?
A:可以室温放置!但是实际实验中我们在血清稀释液和抗体封闭液中都有0.3% Triton X100,所以单独加Triton的步骤 许多人慢慢也就不用了。当然如果灌注的实在不好,这一步还是应该有的!

Q:有的免疫组化的步骤上在一抗孵育后还要用10%的蛋清封闭内源性生物素,我看您介绍的免疫细胞化学染色上没有这一步,是不是这一步对免疫细胞化学染色没有必要?
A:我看到过这种做法,这和一个实验室的习惯有关,不应强求,但是我认为这都是辅助的做法,对实验最终的结果影响不大。
记得有一次我问我们科里的一个专门做组化染色的技术员(我们这里的专家),您认为组化染色染色最重要的步骤是什么,她的回答是:只要一抗好,其他都是次要的。

Q:我的PBS配方:1000ml蒸馏水中含NaCl 9g,Na2HPO4.12H2o 6g, NaH2PO4.2H2O 0.4g, 你看是不是免疫细胞化学染色中用到的PBS
A:我们这里的是:(0.05M)
Na2HPO4.12H2O ---66.15g
NaH2PO4.H2O ----6.66g
NaCl -------100.00g
KCL--- -----4.50g
加双蒸水至4500ml,用HCl或NaOH调节PH到7.4
使用时稀释5倍,即0.05M。
顶部
sunnyB[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77335
精华 0
积分 581
帖子 862
信誉分 100
可用分 5059
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
32
 

想做细胞内染色检测细胞因子:iL-2、iL-10、iL-12和γ-干扰素。不知道哪位gg,jj给我一个大致的技术路线呢?多谢了!
顶部
66+77[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75637
精华 1
积分 596
帖子 785
信誉分 103
可用分 4751
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
33
 
我比较同意你们科里专家的看法,一抗最重要,另外,您觉得PBS的不同配方对实验结果有影响吗,我总觉得PBS的浓度不是那么重要
顶部
sunnyB[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77335
精华 0
积分 581
帖子 862
信誉分 100
可用分 5059
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
34
 

想做细胞内的细胞因子检测:iL-2、iL-10、iL-12和γ-干扰素。不知道主任可否给我一个大致的技术路线呢?多谢了
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
35
 
可以DAB显色完,不用酒精脱水,直接封片么?

————————————————————————

这样作在观察时会有一些水滴,感觉像是气泡!
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
36
 
想做细胞内的细胞因子检测:iL-2、iL-10、iL-12和γ-干扰素。不知道主任可否给我一个大致的技术路线呢?多谢了!

————————————————

您是想用什么样的方法呢?
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
37
 

不知道你做的是 什么细胞的染色?

我所知道的上述细胞因子是T,NK等细胞表达的分泌到胞外的,你做细胞内的检测不知道能不能得到结果呢?
顶部
TAT[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74236
精华 0
积分 507
帖子 694
信誉分 100
可用分 4298
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
38
 
我也有相似的问题,我在配第一抗体稀释液时仅用了PBS,和1%的牛血清,结果也不满意,不知道是不是上面的原因,谢谢
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
39
 
我也有相似的问题,我在配第一抗体稀释液时仅用了PBS,和1%的牛血清,结果也不满意,不知道是不是上面的原因,谢谢

——————————————

应该是我上面提到的原因!
顶部
sunnyB[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77335
精华 0
积分 581
帖子 862
信誉分 100
可用分 5059
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
40
 

我做的是T淋巴细胞,想检测胞内的细胞因子,比如IL-2、IL-4等。就请主任介绍一个相对好的方法。我不是学免疫的,这方面不太懂,还请主任多提携!多谢!
顶部