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Q:30% Triton X100 和0.3% Triton X100 配好后可以室温放置吗,还是需要现用现配?
A:可以室温放置!但是实际实验中我们在血清稀释液和抗体封闭液中都有0.3% Triton X100,所以单独加Triton的步骤 许多人慢慢也就不用了。当然如果灌注的实在不好,这一步还是应该有的!
Q:有的免疫组化的步骤上在一抗孵育后还要用10%的蛋清封闭内源性生物素,我看您介绍的免疫细胞化学染色上没有这一步,是不是这一步对免疫细胞化学染色没有必要?
A:我看到过这种做法,这和一个实验室的习惯有关,不应强求,但是我认为这都是辅助的做法,对实验最终的结果影响不大。
记得有一次我问我们科里的一个专门做组化染色的技术员(我们这里的专家),您认为组化染色染色最重要的步骤是什么,她的回答是:只要一抗好,其他都是次要的。
Q:我的PBS配方:1000ml蒸馏水中含NaCl 9g,Na2HPO4.12H2o 6g, NaH2PO4.2H2O 0.4g, 你看是不是免疫细胞化学染色中用到的PBS
A:我们这里的是:(0.05M)
Na2HPO4.12H2O ---66.15g
NaH2PO4.H2O ----6.66g
NaCl -------100.00g
KCL--- -----4.50g
加双蒸水至4500ml,用HCl或NaOH调节PH到7.4
使用时稀释5倍,即0.05M。