细胞世界

背景深需要注意以下事项：

a）灌注要过关；
b）需用3％双氧水甲醇溶液浸泡切片；
c）需用0.3-0.4%的triton溶液浸泡切片；
d）延长血清封闭液的作用时间；
e）降低一抗的浓度；（我有一次就是用了较高的一抗浓度，结果没有染出东西，但是降低一抗浓度后，结果非常好，其实这就是抗体的“prozone”－－前区现象）

就您的问题我认为是没有使用血清封闭液的问题。
建议在加一抗前使用血清封闭液，血清封闭液的具体配制如前所述；
血清封闭液一般用5％的羊血清。

我认为脱脂奶粉的封闭效果好像并没有羊血清的好！

干脆不封闭的做法不可取，因为这样染出的背底太高。
失活的胰蛋白酶、脱脂奶粉我都没有用过，不敢枉驾评论，但是如果实在没有羊血清，用3％牛血清白蛋白（BSA）也可以。

不知到您用的血清稀释液是什么，我们这里都是这样配制的（而不只是PBS）：

牛血清白蛋白1.00g＋0.01MPBS 100ml＋叠氮纳0.08g＋30% Triton X100 1ml

这样就相当于在加一抗的同时也进行了封闭。

good luck!

悬浮细胞的免疫细胞化学一般要有甩片机把细胞附着到波片上，之后就一样了！