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标题:[讨论帖]免疫细胞或组织化学染色的相关问题

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发表于 2012-3-13 12:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #50 kewanqi2011 的帖子

应该还是非特异性着色的问题，封闭的一定要做好！
显色的时间一定要控制好，我的经验：如果有结果，那么就会在30min内显色，超过30min就会有很多的非特异性染色。
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发表于 2012-3-13 12:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
免疫组化时内皮细胞爬片是否需要涂多聚赖氨酸

—————————————————————————————————

最好还是涂上多聚赖氨酸，以防细胞在组化过程中的多次清洗中脱落！
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eric930[使用道具]
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发表于 2012-3-13 12:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做时是让细胞自己长在洗净并高压灭菌后的盖玻片上，请问如何加多聚赖氨酸处理？

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我昨天用10%的中性甲醛固定了一些细胞爬片，室温下干燥后在显微镜下看了看，发现细胞都已变形，不知是甲醛的缘故还是PBS的问题？ 我PBS的配制是（NaCl 7.2g/L + Na2HPO4 1.48g/L +KH2PO4 0.43g/L），请问您那儿都是用什么方法来固定细胞爬片的？

谢谢！
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发表于 2012-3-13 12:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

把盖玻片放到培养板里之后加入PLL就可以了。

我们这里固定细胞都是用4％多聚甲醛。

PBS一般不会出什么问题的！
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发表于 2012-3-13 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是人骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞的骨钙素免疫组化，结果是胞浆胞核都染色，是假阳性吗？
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发表于 2012-3-13 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #55 HP007 的帖子

应该是什么地方着色？？您确定是胞浆胞核都染色吗，贴一张pp看看！
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qumm1985[使用道具]
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发表于 2012-3-13 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问主任一个比较菜的问题：作细胞爬片用固定液固定后，是直接晾干存放（-4还是-20度？），还是用双蒸水　或是PBS洗一下，然后晾干（不凉干？）放入冰箱保存？，　另，组织冰冻切片冷丙酮固定后，直接放负20度保存，还是用PBS或双蒸水洗一下，再放入冰箱保存？，谢谢。
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发表于 2012-3-13 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
据文献所描述是胞浆染色，但是我用苏木素复染，胞核没衬上啊。
可惜照片没有扫描
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园丁##[使用道具]
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发表于 2012-3-13 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问主任一个比较菜的问题：作细胞爬片用固定液固定后，是直接晾干存放（-4还是-20度？），还是用双蒸水　或是PBS洗一下，然后晾干（不凉干？）放入冰箱保存？，　另，组织冰冻切片冷丙酮固定后，直接放负20度保存，还是用PBS或双蒸水洗一下，再放入冰箱保存？，谢谢。
应该是PBS洗一下，晾干后-4度冰箱保存，但是时间最好也不要太长。

——————————————————

组织冰冻切片应该是-20度冰箱保存。
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发表于 2012-3-13 12:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我准备做培养细胞的原位杂交，以确定病毒在细胞中的增殖情况。以下是我的设计方案，请指教一下，谢谢!

选择对数生长期Bme悬浮细胞，用1000r/min离心5分钟沉淀细脏然后用适量的病毒液接种细胞，吸附1小时左右，不去掉病毒液，加一定量培养基于培养瓶内，静止培养。同时设立对照。

收集培养2小时、12小时、l天、2天、3天、4天、5天、6天、7天的感染细胞和对照正常细胞，用3000r/min离心30分钟，去掉上清液，沉淀细胞经过固定、脱水，为做原位杂交准备。

1，固定：固定 甲醇：冰醋酸 3：1 30~45分钟。
2，脱水： 梯度乙醇脱水
3，细胞悬液固定在载玻片上
4，原位杂交

为了防止细胞脱落，载玻片用多聚赖氨酸处理。如何将固定好的细胞固定在载玻片上？

请各位支招!
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