细胞世界

我第一次用lipofectamine2000，请问一下转染率大概是多少？我了解转染率与质粒 与质脂体的比例，细胞融合的百分数，转染时间有关系。但是我筛选的细胞株比较小，如果让细胞汇合到80％，细胞的个数要比说明书上的参考个数多一倍多，我想问转染时加入的质粒的量与细胞的个数有关系吗？ 如果有，我是不是应该比说明书中的参考量多加一些呢？在转染的五六个小时中，大家说细胞有增殖吗？ 我怎么感觉经过五个小时的转染后，细胞反而少了呢？谢谢

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我转的是平滑肌细胞，转染效率是接近100%，用的是lipofectamine2000，我全是按照说明书上操作的，脂质体的量固定，质粒加多了也没用，脂质体是媒介，但增加脂质体又会对细胞有损失，所以一定要合适的比例，最好摸索一下，一般在无血清培养基转染5-6h，不考虑增殖的影响。

个人认为，Lipofectamin2000的效率还是挺高的。我曾为另外一个公司的转染试剂作试用报告，与LF2000相比，毒性是小了，效率上却差了很多。但是LF2000的效率和毒性有的时候也受生产批次的影响，我们实验室因为使用较多，所以试好了哪一个批次的就会买一些备用。我还是推荐质粒与LF2000的比例为1：2，即转染六孔板，我一般常用4微克的质粒和8微升的LF2000。当然，转染效率要看细胞的状态，质粒的纯度，脂质体的毒性，细胞的种类等。转染时，细胞最好处于对数生长期，此时转染效率最高。细胞的种类也很重要，像293A，293T，HeLa等都是转染效率较高的细胞，一般可以达到70%。有一些细胞是很难转的。一般转染6小时就可以了，理论上说不用撤液，但是脂质体毒性还是不小的，应该撤液。若是转染对细胞生长有毒性的蛋白，保持1：2的比例，质粒和脂质体都适当少加。具体某一个细胞系，某一个质粒的操作条件可能还需操作者自己摸索。

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我也是用6孔板做转染的，都说加入脂质体和质粒之后的总共体积是500微升每个孔，那么我想知道如果放在培养箱里5个小时，不会干掉吗？？

我也是用6孔板做转染的，都说加入脂质体和质粒之后的总共体积是500微升每个孔，那么我想知道如果放在培养箱里5个小时，不会干掉吗？？

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这是所配的转染试剂的体积，你的六孔板里还得加opti-MEM 1.5ml啊。