细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [求助]请教树突状细胞的培养经验

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 102  6/11 |‹‹‹234567891011››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[求助]请教树突状细胞的培养经验

tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
51

发表于 2012-3-18 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
论 文： 用限定化学成分的培养基培养的CHO细胞生产重组蛋白

STEPHEN F. GORFIEN,JOYCE L. DZIMIAN,MARY LYNN TILKINS,GLENN P. GODWIN AND RICHARD FIKE. Life Technologies, Inc. 3175 Staley Road., Grand Island, NY 14072. U.S.A

1. 摘 要
　
中国仓鼠卵巢细胞（CHO）的无血清培养，作为一种获得高水平表达重组蛋白，同时简化产物的回收和下游步骤的方法越来越普遍使用。然而，无血清培养基仍然含有一种或多种动物来源的成分，包括白蛋白、胎球蛋白、各种荷尔蒙以及其它蛋白质。我们已经证实从CHO培养基配方中去除动物来源蛋白是可行的。血浆蛋白成分如白蛋白和胎球蛋白可以用植物来源的水解产物代替，尽管这种培养基（CHO III PFM）是无蛋白的，但是其化学成分还是没有限定。CD CHO培养基配方是限定化学成分的，不含动植物来源的蛋白质或水解产物。与其它培养基相比，CD CHO虽然相对其它培养基细胞峰密度和最高表达水平出现时间的滞后，但在该培养基中有更佳的峰密度和最高表达水平。我们通过加入丁酸钠成功提高了在最高细胞密度时的表达水平，重组细胞系在生长和重组产物的表达方面表现出一种反比关系，限制细胞密度的方法可能会有效地增强表达。

2. 前 言
　
对于大规模培养CHO细胞和重组产物表达，因为与使用血清相关的费用、效果和调控的因素越来越成为问题，所以减少或者去除培养基中的血清成分的方法变得越来越常见。因为无血清培养基可能含有各种未限定成分，包括蛋白质、多肽、蛋白水解物，这些配方是血清培养基的一种改进，但可能并没有去除与血清相关的因素。比无血清培养基进一步改进的是无蛋白培养基。这种无蛋白培养基配方中，传统的成分例如白蛋白、胰岛素和铁传递蛋白被其它的成分替代。然而除非特别标明配方是无蛋白、限定化学成分，培养基中可能包含动植物来源的蛋白水解物，其中可能有促进生长和表达的小分子多肽。我们实验室研制的CHO III PFM培养基是普通的未限定化学成分的无蛋白培养基的一个范例，它含有植物中提取的水解物。我们证明细胞在适应这种培养基之后，与在另外一种无血清培养基CHO-S-SFM II相比，生长相同，而表达水平提高。然而CHO III PFM 去掉植物水解物后，它就不再支持重复传代培养中rCHO细胞的生长。因此一种全新的既无蛋白又是限定化学成分的培养基配方面世了。CD CHO培养基不含动植物来源的或者合成的蛋白质、多肽成分。对于想使用无蛋白培养基和/或限定培养体系的用户，我们调节细胞适应不同的培养基以及调节生长和表达方面的经验是具有指导意义的。

3.材料和方法：

3.1培养基，细胞和培养条件

所有使用的培养基配方都不包含核苷酸而且进行了悬浮培养优化。CHO-S-SFM是一种低蛋白（<100µg/mL）无血清培养基。CHO III PFM是一种基本上没有蛋白质的定制配方，不包含动物来源的蛋白。CD CHO培养基是一种限定化学成分的配方，不包含动植物来源的蛋白质、多肽或者水解产物。
　
CHO（DHFR缺陷型）细胞购自ATCC（CRL-9096，Rockville. MD），然后用以下两种质粒转染：含有氨甲喋呤（MTX）抗性基因的pSV2dhfr（37146）（购自ATCC）和表达ßgal的质粒pCMV ßgal （购自Pam Hawley-Nelson，Invitrogen）。转染使用LIPOFECTAMINE™试剂（Invitrogen公司），用1.2µM MTX 进行筛选，培养物维持在含0.3µM MTX的悬浮培养基中，通常每隔3-4天就以3×10活细胞/ml密度进行传代培养，在125ml体积的塑料摇瓶中培养（20-35ml培养体积），置于有轨摇床上，平转速度为125-135rpm，保持空气湿润，CO2密度为8%。对于rCHO细胞在无血清悬浮培养基CD-CHO中的情况我们进行了放大培养评估，采用5 L Celligen™ 生物反应器（New Brunswick Scientific，Edison，NJ），接种密度为1-3×10活细胞/毫升，最终工作体积是3.8 L。每天取样来测定总细胞和活细胞的数量，葡萄糖和氨基酸的利用情况，乳酸和氨气的累积以及重组产物。PH值、溶解氧和温度以及速度保持原有的设定，分别为：7.40，50%的空气饱和度和37.0℃以及90rpm。在每个实验中，在接种后第9天加入浓缩的10x葡萄糖和谷氨酸（终浓度分别为3.0g/L和1.0g/L）添加剂。
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
52

发表于 2012-3-18 12:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
3.2重组蛋白定量和表达增强

用一种改进的方法测量（Hall，等〔4〕和Miller〔5〕）细胞裂解物中 rß－半乳糖苷酶。简单的说，从每个样品中收集2.0ml细胞悬浮物，经过两次冻融过程后，100xg离心4分钟，收集上清测定rß－半乳糖苷酶含量。将100ul上清加入到1.0ml，pH值7.0的 Z buffer中(0.06M Na2PO4，0.04M NaH2PO4, 0.01M KCl, 0.01M MgSO4. 7H2O, 0.05M ß-Mercaptoethanal), 然后加入200ul的ONPG（o-nitrophenyl-ß-D-galactoside, 4.0mg/ml溶于dH2O），37℃温育120分钟。加入500ul的终止缓冲液（1M Na2CO3）终止反应，以相应的培养基作为空白对照，在波长为420nm处测定吸收值。

我们研究出一种加入丁酸钠的方法来增强rß－半乳糖苷酶的表达。培养物在接种后0或2天加丁酸钠至浓度为0.1mM或1.0mM温育，或者在接种第4天加入1.0mM丁酸钠分析重组蛋白表达和生长的效果。

4. 结 果

rß-Gal CHO细胞很容易适应CD CHO培养基，而且一旦适应以后，比CHO-S-SFM II(图1)和CHO III PFM(数据未列出)能得到更高的总细胞密度。比较CD CHO培养基和CHO-S-SFM培养基中培养物的rß-Gal水平（图1所示），我们发现在CD CHO中细胞生长和rß-Gal的表达水平呈现反比，直到生长达到平台期的时候r b-Gal才能高水平表达。在不同培养时期加入不同浓度的丁酸钠来增强rß-Gal表达（图3所示）。当高浓度丁酸钠存在时（1.0mM），在接种当天加入生长和表达会受到抑制，而在第2天加入则会抑制生长而增强表达。当低浓度的丁酸钠存在的时候（0.1mM），在接种当天和第2天加入都会增强重组蛋白的表达水平。图4所示是将Celligen 生物反应器和摇瓶对照培养进行比较，发现两者生长动力学相似，而反应器中rß-Gal的表达水平更高。接种后第九天补充葡萄糖和谷氨酸，但是没有提高rß-Gal在第9天的表达水平峰


图1：对比CD-CHO培养基和CHO-S-SFM II中生长和rb－Gal表达。CD-CHO中总的细胞密度持续上升（从第三天到第八天，上方图），但在CHO-S-SFM II培养基密度保持不变；rb-Gal表达在两种培养条件下持续升高（上图），但在CD-CHO中表达的产物总量更多。


图2HFR扩增的rCHO细胞系在生长和表达之间的反比关系。产生r b-Gal的CHO细胞系只有在生长曲线（上方图）到达平台期之后才高水平表达（上方图）。


图3：丁酸钠的浓度和加入时间对生长和表达的影响。rCHO细胞的生长（上方图）在一定浓度丁酸钠加入后受到抑制。rß-Gal的表达（下方图）水平提高，除了在当天加入1.0mM丁酸钠以外，其它情况都超过了第8天的对照水平。


图4.在5L Celligen生物反应器中的生长和rß-Gal表达。rCHO细胞的生长动力学在5L 的搅拌罐反应器（3.8L工作体积）和250ml（75ml的工作体积）的摇瓶中是相似的（上图）。在生物反应器中rß-Gal表达水平（下图）更高。补充葡萄糖和谷氨酸（如第9天箭头所示）加入太迟，不能在到达第九天的峰值后进一步提高产量。
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
53

发表于 2012-3-18 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
5. 讨 论

我们现在正在考虑替换工业用培养基中的动物来源的成份。已经证实CHO细胞有可能在完全限定化学成份、不含动植物来源蛋白质、多肽或水解产物的培养基中生长。与无血清培养基（CHO-S-SFM II）和无蛋白、未限定的培养基（CHO III PFM）相比，在CD CHO培养基的批量培养能获得高密度的细胞。在到达细胞密度的峰值后，CD CHO培养基中培养的DHFR扩增的rCHO细胞系出现高表达水平。已经证实丁酸钠是细胞生长的强抑制剂，还能促进蛋白质合成〔6〕。其他人也证实多克隆抗体〔7〕和重组蛋白质〔8、9〕的表达水平在加入丁酸钠之后提高。在我们的研究中，通过加入丁酸钠成功限制了细胞的生长并增强了rCHO细胞的rß-Gal表达水平。然而，浓度和加入时间对蛋白质表达的优化也非常重要。用5L的生物反应器能在CD CHO中大规模培养。我们利用限定化学成份的培养基培养CHO细胞的实验表明您能够有更好的选择，用以替换含血清培养基、无血清或无蛋白但没有限定化学成份的培养基配方。

参考文献

1. Jayme, D. M., Epstein, D. A., Conrad, D. R. (1988)Tetal bovine serum altertives, Nature 334:547-8.
2. Rosa, M. D. (1989) serum substitutes: is there a solution:Biopharm 2:16-17.
3. Lambert, K. J. , and Birch, J. R. (1985) Animal Cell Biotechnology, R. E. Spier and J. B. Griffiths, Eds. (Academic Press,London),pp.85-122.
4. Hll, C. V. , Jacob, P. E. , Ringlod, G. M. , Lee, F. (1983) Expression and regulation of Escherichia coli lacZ gene fusions in mammailian cells. J Mol Appl Gen 2(1):101-109
5. Miller, j. (1972) Experiments in Molecular Genetics. Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor NY.
6. Kruh, J. (1982) Eeffects of sodium butyrate, a new pharmacological agent, on cells in culture. Mol Cell Biochem 42:65-82.
7. Oh, S. K. , Vig, P. , Chua, F. , Teo, W. K. , Yap, M. G. S. (1993) Substantial overproduction of antibodies by applying osmotic pressure and sodium butyrate. Biotechnol Bioeng 42:601-610.
8. Dorner, A. J. , Wasley, L. C. , Kaufman, R. J. (1989) Increased synthesis of sereted proteins induces expression of glucose-regulated proteins in butyrate-treated Chinese hamster ovary
cells. J Biol Chem 264(34):20602-20607
9. Palermo, D. P. , DeGraaf, M. E. , Marotti, K. R. , Rehbery, e., Post, L. E. (1991) Production of analytical quantities of recombinant proteins in Chinese hamster ovary cells using sodium butyrate to elevate gene expression. J Biotechnol 19:35-48.
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
54

发表于 2012-3-18 12:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
GlutaMAX™——最小化有毒性氨的产生(新技术)

通过使用GlutaMAX™培养基，防止L-谷氨酰胺降解、增加稳定性、最小化有毒性氨的产生。

L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分，不幸的是它不稳定，在中性的水溶液中会自发降解。因而，需要频繁地补加L-谷氨酰胺，——伴随破坏无菌状态的可能性——并产生毒性水平的氨。

使用GIBCO™GlutaMAX™培养基，可以避免由于L-谷氨酰胺降解带来的问题。

二肽与众不同



图1 GlutaMAX™二肽在121℃、20分钟高压灭菌后的稳定性



图2 D-MEM 添加GlutaMAX™ -I或L-谷氨酰胺，分装到小瓶中，贮存在37℃。每天取出样品并冻存在-20℃，通过HPLC检测氨的水平。

图3 D-MEM 添加GlutaMAX™ -I或L-谷氨酰胺，分装到小瓶中，贮存在37℃。每天取出样品并冻存在-20℃，通过HPLC检测GlutaMAX™ -I和L-谷氨酰胺的水平。


使用GlutaMAX™培养基，L-谷氨酰胺在贮存和孵育时不会降解。氨的产生最小化。L-谷氨酰胺的释放可以控制。通过鼠杂交瘤细胞生产的单克隆抗体量增加。此外，在使用的时候不需要添加L-谷氨酰胺。
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
55

发表于 2012-3-18 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
作用原理

GlutaMAX™二肽在细胞内被氨基肽酶分解，从二肽中释放L-谷氨酰胺和L-丙氨酸(GlutaMAX™ -I)。在大部分细胞培养系统，二肽谷氨酰胺可以象L-谷氨酰胺同样有效的被利用。GlutaMAX™ -I二肽是L-谷氨酰胺的直接替代物。无需适应，它既适合于贴壁细胞培养，也适合于悬浮细胞的培养，包括下列情况：

● 需要长期的孵育而不补充营养的培养系统（例如克隆分析）
● 要求最优标准化培养基进行长期的研究（例如毒性检测）
● 对氨敏感的培养系统（例如高密度生物反应器）
● 代谢研究


多种形式可供选择

许多广泛使用培养基的GlutaMAX™二肽替代L-谷氨酰胺形式可以得到。此外，GlutaMAX™二肽可以作为单独的补充物而获得，提供200mM溶液直接替代你当前使用的培养基形式。

1. Brand, K., Feki, W., Hintzentern, J., von Langer, K. Luppa, P., and Schroener, C. (1989) Metabolism 38, 29.
产 品 货 号 规 格 价 格
GlutaMAX™ Media
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM) (1X),liquid (low glucose, contains sodium pyruvate) 10567-014 500 ml 查 询
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM) (1X), liquid (high glucose, contains sodium pyruvate) 10569-010 500 ml 查 询
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM) (1X), liquid (high glucose, contains no sodium pyruvate) 10566-016 500 ml 查 询
Dulbecco's Modified Eagle Medium (D-MEM) (1X), liquid (high glucose, contains HEPES buffer, but no sodium pyruvate) 10564-011 500 ml 查 询
D-MEM/F-12, (1X) liquid, 1:1 10565-018 500 ml 查 询
F-12 Nutrient Mixture, (Ham) (1X), liquid 31765-035 500 ml 查 询
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) (1X), liquid 31980-030 500 ml 查 询
Minimum Essential Medium (MEM) alpha Medium(1X), liquid (contains no ribonucleosides or deoxyribonucleosides) 32561-037 500 ml 查 询
Minimum Essential Medium (MEM) alpha Medium(1X), liquid (contains ribonucleosides and deoxyribonucleosides) 32571-036 500 ml 查 询
Minimum Essential Medium (MEM), liquid(contains Earle's Salts) 41090-036 500 ml 查 询
Minimum Essential Medium (MEM), liquid(contains Earle's Salts and HEPES buffer) 42360-032 500 ml 查 询
Opti-MEM* I Reduced-Serum Medium (1X), liquid 51985-034 500 ml 查 询
RPMI Medium 1640 (1X), liquid 61870-036 500 ml 查 询
RPMI Medium 1640 (1X), liquid(contains HEPES buffer) 72400-047 500 ml 查 询
Reagents
GlutaMAX™ -I Supplement 35050-061 500 ml 查 询
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
56

发表于 2012-3-18 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
新型高级颗粒化技术培养基(Advanced Granulation Technology™)

简化用于单克隆抗体生产和重组蛋白表达的复杂培养基

自从十九世纪六十年代初GIBCO™ 这一品牌建立以来，一直与细胞培养的技术突破相联系，包括彻底变革这一过程的新颖的培养基形式；1963年的干粉培养基（DPM），1992年的液体浓缩培养基（LMCs），和2002年创新的高级颗粒化技术培养基(AGT™)。

高级颗粒化技术培养基是一种全新的、易于使用的、颗粒状的干粉培养基。AGT™形式使许多的复杂配方适用于干粉培养基，提供了完全单一组分的形式，从而易于使用和从研究到生产的按比例放大。

我们开发了AGT™培养基，它把药物生产的fluid bed granulation应用到细胞培养的营养培养基生产上，这一过程适用于完全配方的多种多样的无血清、无蛋白和化学成分限定的营养培养基。


Invitrogen 公司使用fluid bed granulation药物生产技术生产无血清、无蛋白和化学成分限定的GIBCO™培养基，GIBCO™培养基利用一种新颖的干粉颗粒形式，易于水合和迅速的使用。


图1 培养基准备
Prep with Advanced Granulation Technology™ Media Prep with Dry Powder Media
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
57

发表于 2012-3-18 12:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
完全、单一组分形式、pH值自动调节的培养基

与传统的细胞培养形式相比，新颖的AGT™形式具有明显的优点。AGT™培养基是完全的、pH值调节的培养基，如果必要的话，可能仅仅需要补充常规的L-谷氨酰胺。

AGT™完全培养基的基本优点在于，它为使用者提供了一种原材料，这种原材料能够降低涉及原材料计划、加工和检测的费用及时间。由于AGT™培养基是完全的、pH值预先调节和仅仅需要补充常规添加物的培养基，因而培养基的准备时间也被缩短。此外，由于AGT™颗粒溶解迅速，总的培养基准备时间减少。

检测生长和产量的性能

在杂交瘤细胞、CHO、VEROP和HEK293细胞的生长和生物生产的研究中，与成分相同、通过传统的液体和干粉加工程序生产的培养基相比，来源于AGT™加工程序的GIBCO™特殊培养基具有相同的或者更高的性能（见图2）。


图2 AGT™无血清培养基性能类似或优于1x 液体培养基


经放大验证的性能

AGT™培养基不仅适合于研究使用，它们也最适宜工业化规模的应用。在包括PH值、渗透压和均一性（通过HPLC分析氨基酸、维生素和其它组分）的专门研究中，证明了具有可放大性（见图3）。


图3 在全部的AGT™批次规模放大时，pH值和渗透压保持一致


此外，来自正在进行的实时稳定性研究的数据表明,通过AGT™加工的无血清培养基的稳定性至少与传统的生产方式生产的培养基相同。
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
58

发表于 2012-3-18 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在可以获得GIBCO™ AGT™形式的无血清和化学成分限定的培养基作为标准的目录项目，现在可以获得四种AGT™形式的GIBCO™ 特殊无血清培养基：CD（chemically-defined）杂交瘤培养基、CD CHO培养基、VP-SFM和CD 293培养基。其它的GIBCO™ AGT™ 形式的培养基可以按照定制的要求获得。

值得注意的是一些商业渠道获得的有些“化学成分限定的”营养培养基实际上包含有蛋白质。但是，GIBCO™ CD培养基的客户可以确信这些培养基是化学成分确定的：成分有明确的化学结构，没有人类或动物来源的成分，包括蛋白质和水解产物。通过特别的成分限定，GIBCO™ CD培养基能够提供产品性能的一致性。通过使用非动物来源的成分，减少了外源试剂污染的可能性。

CD杂交瘤培养基 最适宜于普通的杂交瘤生长和单克隆抗体的生产及流水线纯化和下游的加工。适合于重组蛋白骨髓瘤细胞系和传统的杂交瘤细胞的培养，特别优于无血清和添加有血清的培养基。成分中不包含有酚红，可以最小化潜在的雌激素样效应和纯化的问题。在培养基中添加250x 胆固醇脂浓缩液时，CD杂交瘤培养基允许胆固醇依赖的细胞系如NS0、NS-1和相关的细胞系生长和表达蛋白。尽管这是为批次系统设计的，但是它很容易为其它用途修改。

CD CHO培养基 最适宜于悬浮培养的中华仓鼠卵巢细胞的生长，重组蛋白和单克隆抗体的表达。成分中不包含有酚红，可以最小化潜在的雌激素样效应和纯化的问题。成分中不包含有次黄嘌呤和胸(腺嘧啶脱氧核)苷以便于在dhfr-扩增系统中使用。与添加血清、无蛋白和无血清培养基组分相比较，CD CHO培养基证明具有优越的性能。设计是为批次系统设计的，但是它很容易为其它用途修改。

VP-SFM 可作为目录产品而获得。GIBCO™ VP-SFM是一种无血清、超低蛋白培养基，专门为培养VERO细胞而设计。它也适合于COS-7、MDCK、BHK-21和HEp-2细胞系的生长。它特别适合于繁殖病毒和其它细胞培养应用，例如生产重组病毒和单克隆抗体。

VP-SFM中的痕量蛋白来源于重组蛋白。转铁蛋白已经用一种离子螯合物替代，白蛋白用来自植物的二肽或三肽代替。唯一需要的添加物是L-谷氨酰胺，依赖于使用的细胞系统，L-谷氨酰胺的添加浓度应该在2～6mM。很多细胞系例如VERO、BHK和HEP-2不需要适应VP-SFM：但是一些细胞系可能需要连续的适应。

CD 293培养基 是经过专门工程改造的用于高密度悬浮培养293细胞的培养基。作为对于与传统293细胞培养相关困难的回应，GIBCO™ CD 293培养基是一种化学成分限定、无蛋白培养基。

CD 293培养基没有任何动物来源成分、不确定的裂解物或水解产物。CD 293培养基具有广泛的应用，包括腺病毒、逆转录病毒和其它病毒的繁殖，重组蛋白的生产和药物筛选的使用。

新型高级颗粒化技术培养基 ● 最优化的干粉颗粒形式的GIBCO™ 无血清培养基
● 完全的、pH预先调节的：只需加入水和谷氨酰胺（如果需要）
● 溶解快速，需要最少的培养基准备时间
● 保证培养基新鲜
● 容易进行从研究到生物生产的放大
● 与液体培养基相比较，降低了冰箱贮存要求
● 贮存期长
● 可以得到定制配方培养基
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
59

发表于 2012-3-18 12:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
产 品 货 号 规 格 价 格
CD CHO AGT™ 12490-017 1×1L 查 询
12490-025 1×10L 查 询
CD Hybridoma AGT™ 12372-025 1×1L 查 询
12372-017 1×10L 查 询
VP-SFM AGT™ (add L-glutamine if required) 12559-027 1×1L 查 询
12559-019 1×10L 查 询
CD 293 AGT ™(add L-glutamine if required) 12529-020 1×1L 查 询
12529-012 1×10L 查 询
Related Products
L-Glutamine 25030-081 100ml 查 询
250X Cholesterol Lipid Concentrate 12531-018 100ml 查 询
Distilled Water 15230-162 500ml 查 询
CHO-S Cells (adapted to CD CHO and CHO SFM media) 11619-012 3ml 查 询


哺乳动物细胞和昆虫细胞（新产品信息）

● 预先适应GIBCO™ 无血清培养基（SFM）生长
● 进行基因表达系统性能检测
● 节省适应所需要的时间和费用
● 方便、可靠的供给
顶部
tianmei001[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73832
精华 1
积分 585
帖子 806
信誉分 102
可用分 4823
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-28
状态 离线
60

发表于 2012-3-18 12:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
Invitrogen目前提供了9种细胞系，这9种细胞系预先适应了在新一代GIBCO™ 无血清培养基（SFM）中的生长，提供了在小型和大规模的系统中一致、可靠的性能。

5种哺乳动物细胞和4种昆虫细胞系明显地节省了实验的时间和减少了与适应相关的费用。生长率同于或优于其它商业上可获得的细胞。Invitrogen是细胞培养产品，包括优化的特殊培养基，的最主要的提供商。现在细胞加入到我们的产品行列，为研究者订购高质量的培养基和可靠来源的细胞提供了方便和经济上的实惠。

性能检测特征：

● 支原体和无菌状态检测
● 冷冻检测复苏后生长和活力
● 主要细胞库鉴定检验，包括同功酶检验和鉴定核型
● 报告每一批次总的传代次数和SFM适应传代次数
● 每一批发货附上冷冻－复苏，放大和冷冻保存的程序


哺乳动物细胞系

293-F和293-H，SFM Adapted——人类５型腺病毒转化和在293SFM培养基中适应生长的原代人胚胎肾细胞，高水平表达蛋白质，证明使用Lipofectamine™ 试剂和Plus™ 试剂有较高的转染效率。293-F细胞系具有高于一般水平生长率的特点。293-H很容易转换到单层培养以进行粘附应用。

CHO-S,SFM Adapted——中华仓鼠卵巢细胞，生长在CD CHO培养基，证明使用Lipofectamine™ 试剂有较高的转染效率。

CHO-7L，SFM Adapted——来源于CV-1猿猴细胞的非洲绿猴肾细胞，用SV40突变体转化，在VP-SFM培养基中适应生长。可以扩增和过量表达转染的基因，证明使用Lipofectamine™ 试剂和Plus™ 试剂有较高的转染效率。

Primary Human Keratinocytes,Cryopreserved in Defined Keratinocyte-SFM——原代人角质细胞被加工和冻存在GIBCO™ 限定角质细胞－SFM培养基中，因而有效的适应了这种培养基。在从冻存中复苏后，5天内细胞可以达到完全的汇合培养。用16群加倍进行寿命性能检测，大多数批号证明具有20＋加倍。


图1 预先适应CD CHO培养基的CHO细胞。培养第5天
图2 预先适应293SFM培养基的293细胞。培养第3天


图3 预先适应Express Five™ SFM培养基的High FiveTM细胞。培养第3天 图4 预先适应Drosophila-SFM培养基中悬浮生长的D.Mel2(or Schneider S2)细胞。培养第2天
顶部
 102  6/11 |‹‹‹234567891011››