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标题:[求助]请教树突状细胞的培养经验

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 小中大
昆虫细胞系

Sf9, SFM Adapted——来源于亲本spodoptera frugiperda 细胞系IPLB-Sf21-AE的分离克隆，适应于悬浮生长在Sf900Ⅱ,SFM培养基，一般通过使用杆状病毒表达系统（BEVS）来进行重组蛋白的表达。

Sf21, SFM Adapted——分离自spodoptera frugiperda卵巢细胞，适应于悬浮生长在Sf900Ⅱ, SFM培养基，一般通过使用杆状病毒表达系统（BEVS）来进行重组蛋白的表达。

D.Mel2(or Schneider S2), SFM Adapted——分离自Drosophila melanogaster晚期胚胎，适应于悬浮生长在Drosophila-SFM培养基，常常通过磷酸钙转染试剂盒用来进行瞬时或稳定表达重组蛋白。

High Five™, SFM Adapted——来源于亲本Trichoplusia ni BTI-TN-5B1细胞系的分离克隆，适应于悬浮生长在Express Five™ SFM培养基——最适于High Five™和其它的Trichoplusia细胞系。High Five™细胞系常常通过使用杆状病毒表达系统（BEVS）用来进行重组蛋白的表达。

定货信息 类 型 细胞系 目录号 规 格 价 格 适应无血清培养基 目录号 规 格 价 格
Insect D. Mel 2 10831-014 3 ml 查 询 Drosophila-SFM 10797-017 500 ml 查 询
10797-025 1000 ml 查 询
Insect High Five™ Cells B855-02 3×10 cells/ml 查 询 Express Five® SFM 10486-025 1000 ml 查 询
Insect Sf9 11496-015 3 ml 查 询 Sf-900 II SFM 10902-096 500 ml 查 询
10902-088 1000 ml 查 询
10902-070 10 L 查 询
Insect Sf21 11497-013 3 ml 查 询 Sf-900 II SFM 10902-096 500 ml 查 询
10902-088 1000 ml 查 询
10902-070 10 L 查 询
Mammalian 293-F 11625-019 3 ml 查 询 293 SFM 11686-029 1000 ml 查 询
Mammalian 293-H 11631-017 3 ml 查 询 293 SFM 11686-029 1000 ml 查 询
Mammalian COS-7L 11622-016 3 ml 查 询 VP-SFM 11681-020 1000 ml 查 询
Mammalian CHO-S 11619-012 3 ml 查 询 CD CHO 10743-011 500 ml 查 询
10743-029 1000 ml 查 询
Mammalian Primary Human Keratinocytes 12332-011 1 ml 查 询 Defined Keratinocyte-SFM 10744-019 500 ml 查 询
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相关产品 产 品 目录号 规 格 价 格
Blasticidin S HC1 R210-01 50 mg 查 询
Calcium Phospate Transfection Kit K2780-01 75 reactions 查 询
Cellfectin® Reagent 10362-010 1 ml 查 询
Geneticin® (G418 Sulfate), liquid 10131-035 20 ml 查 询
10131-027 100 ml 查 询
Geneticin® (G418 Sulfate), Powder 11811-023 1 g 查 询
11811-031 5 g 查 询
Hygromycin B 10687-010 20 ml 查 询
Lipofectamine™ Reagent 18324-111 0.5 ml 查 询
18324-012 1 ml 查 询
18324-020 4×1 ml 查 询
Lipofectamine™ 2000 11668-027 0.75 ml 查 询
11668-019 1.5 ml 查 询
Plus™ Reagent 11514-015 0.85 ml 查 询
Zeocin™ R250-01 1 g 查 询
R250-05 5 g 查 询


新型的FreeStyle™ 293表达系统

Invitrogen 公司新型的FreeStyle™ 293表达系统，简单和优化了293细胞中蛋白质的生产。FreeStyle™ 系统允许对悬浮的293细胞进行转染，在要求大量细胞时，不需要运送许多瓶的贴壁细胞。为了优化293细胞的转染和表达，FreeStyle™ 系统提供：

293fectin™ 转染试剂

提供了悬浮293细胞的最高转染效率。

GIBCO™ FreeStyle™ 293 表达培养基

特别设计使悬浮293细胞能够有效的转染和最佳生长的无血清培养基。

FreeStyle™ 293F 细胞

预先适应了FreeStyle™ 293表达培养基，具有优良操作性能的一个293细胞克隆。

优化的悬浮培养生长

进行蛋白生产时，细胞生长和细胞活性是产品产量的关键。FreeStyle™ 293表达培养基提供无血清培养基中有效的悬浮培养转染和优化的悬浮生长。它不仅没有血清，而且成分中明显的减少了竞争性蛋白组分。你将在表达实验中得到较清楚的蛋白样品并且获得可放大和能够重复的结果。
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 小中大
有效转染

其它转染试剂的供应商推荐使用贴壁293细胞——难于规模放大的流程。特别试验的转染悬浮293细胞的293fectin™ 试剂可以提供高水平蛋白表达的悬浮流程（见图1）。293 fectin™ 转染试剂提供你需要的规模放大转染的效率。


图1 使用FreeStyle™ 293表达系统表达蛋白。FreeStyle™ 293细胞生长在FreeStyle™ 293表达培养基中，用293fection™转染试剂进行瞬时转染。转染后47小时后，收获1×10细胞，检测总蛋白和b-半乳糖苷酶活性。转染的细胞和未转染的细胞有相似的总蛋白水平，但是每毫升转染细胞培养物表达124mg b-半乳糖苷酶。


你需要的结果

我们的FreeStyle™ 293表达系统的每一个组分被设计和检验，以提供你需要的293细胞的悬浮转染的结果。FreeStyle™ 293F细胞是经过选择的容易操作和具有高表达能力的293克隆。它适应了GIBCO™ FreeStyle™ 293 表达培养基，可以节省你的时间和努力。各种组分一起提供有效，可放大，可重复的表达。

产 品 货 号 规 格 价 格
FreeStyle™ 293 Expression Kit K9000-01 1 L FreeStyle™ 293 Expression Medium
1 vial of FreeStyle™ 293F Cells
1 ml of 293fectin™ Transfection Reagent
100 ml of Opti-MEM® I
20 µg of pCMV-SPORT ß-gal 查 询
GIBCO™ FreeStyle™ 293 12338-018 1 L 查 询
Expression Medium 12338-026 6×1 L 查 询
293 fectin™ Transfection Reagent 12347-019 1 ml 查 询
FreeStyle™ 293F Cells R790-07 1×10 frozen cells 查 询


无酚红培养基（新产品信息）

● 细胞标记实验的理想的无毒性培养基
● 允许不可能在经典培养基中进行的特殊的应用
● 可获得定制配方


使用GIBCO™ 无酚红培养基可以扩展细胞标记实验的范围，GIBCO™ 无酚红培养基按照与传统配方相同的精确的标准生产，允许你在经典培养基中不可能进行的特殊应用领域中工作。

酚红，用来作为pH指示剂，可能在一些细胞中呈现雌激素样作用，而且可能对于某些类型细胞具有毒性作用。在细胞实验中所有GIBCO™ 无酚红培养基是无毒性的，同时显示没有雌激素样作用活性。

购GIBCO™ 无酚红培养基比以前更加容易，所有的配方组织在下列列表中，按照培养基的类型进行分类，以提供快速，方便的订购。检查下列列表，发现你需要的配方。如果你的配方不在列表内，我们的定制配方服务部门非常高兴讨论你的要求。
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 小中大
定货信息 产品描述 目录号 规 格 价 格
CD CHO Medium (1X), liquid 10743-029 1,000 ml 查 询
10743-011 500 ml 查 询
CD Hybridoma Medium (1X), liquid 11279-023 1,000 ml 查 询
Cell Culture Freezing Medium-Dimethylsulfoxide (dmso), liquid 11101-011 50 ml 查 询
Dulbecco's Modified Eagle Media (D-MEM)
D-MEM (1X), liquid
(low glucose, with 1.0 g/L D-glucose, and 110 mg/L sodium pyruvate, without L-glutamine)
11054-020 500 ml 查 询
D-MEM (1X), liquid
(high glucose, with 4.5 g/L D-glucose, L-glutamine, and 25 mM HEPES buffer)
21063-029 500 ml 查 询
D-MEM (1X), liquid
(high glucose, with 4.5 g/L D-glucose, without L-glutamine)
31053-028 500 ml 查 询
Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12 (D-MEM/F-12) 1:1 Mixture
D-MEM/F-12 (1X), liquid, 1:1 (contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer) 11039-047 10×500 ml 查 询
11039-021 500 ml 查 询
D-MEM/F-12 (1X), liquid, 1:1 (contins L-glutamine) 21041-025 500 ml 查 询
Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline (D-PBS)
D-PBS (1X), liquid (contains calcium and magnesium) 14040-141 100 ml 查 询
14040-133 500 ml 查 询
14040-182 10×500 ml 查 询
14040-117 1,000 ml 查 询
14040-216 6×1000 ml 查 询
D-PBS (1X), liquid
(contains 1, 000 mg/L D-glucose and 36 mg/L sodium pyruvate, calcium, and magnesium)
14287-080 500 ml 查 询
14287-072 1,000 ml 查 询
D-PBS (1X), liquid (contains no calcium or magnesium) 14190-144 500 ml 查 询
14190-250 10×500 ml 查 询
14190-136 1,000 ml 查 询
14190-235 6×1000 ml 查 询
14190-078 10 L 查 询
D-PBS (10X), liquid (contains calcium and magnesium) 14080-055 500 ml 查 询
D-PBS (10X), liquid (contains no calcium or magnesium) 14200-075 500 ml 查 询
D-PBS, powder (contains magnesium) 21300-025 10×1 L 查 询
21300-058 1×10 L 查 询
D-PBS, powder (contains no calcium or magnesium)

Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) (1X), liquid (contains no calcium or magnesium)

21600-010 10×1 L 查 询
21600-069 1×10 L 查 询
21600-044 1×50 L 查 询
14155-063
500 ml 查 询
Hanks's Balanced Salt Solutions (HBSS)
HBSS (1X), liquid (contains calcium and magnesium) 14025-092 500 ml 查 询
14025-076 1,000 ml 查 询
HBSS (1X), liquid (contains no calcium chloride, magnesium chloride, or magnesium sulfate) 14175-095 500 ml 查 询
14175-079 1,000 ml 查 询
14175-103 10×500 ml 查 询
HBSS (10X), liquid (xontains calcium and magnesium, but no sodium bicarbonate) 14065-056 500 ml 查 询
HBSS (10X), liquid (contains no calcium chloride, magnesium chloride, magnesium chloride, magnesium sulfate, or sodium bicarbonate) 14185-052 500 ml 查 询
HepatoZYME-SFM
Iscove's Modified Dulbecco's Media (IMDM) (1X), liquid (contains L-glutamine)
17705-021 500 ml 查 询
21056-023 500 ml 查 询
Improved MEM Zn++ Option M (Richter's Modification), liquid 10373-017 500 ml 查 询
KaryoMAX® COLCEMIDTM Solution, Iiquid (10 mg/ml), In PBS 15212-012 10 ml 查 询
Leibovitz's L-15 Medium (1X), liquid (contains L-glutamine) 21083-027 500 ml 查 询
Medium 199 (1X), liquid (contains Earle's salts,L-glutamine, and sodium bicarbonate) 11043-023 500 ml 查 询
Minimum Essential Medium (MEM)
MEM Alpha Medium (1X), liquid (contains L-glutamine, ribonucleosides, and deoxyribonucleosides) 41061-029 500 ml 查 询
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MEM (1X), liquid (contains Earle's salts, but no L-glutamine) 51200-038 500 ml 查 询
Modified Eagle Medium (MEM) (2X), liquid 11935-046 500 ml 查 询
Opti-MEM® I Reduced-Serum (1x), liquid 11058-021 500 ml 查 询
Phosphate-Buffered Salines (PBS)
PBS pH 7.2 (1X), liquid 20012-027 500 ml 查 询
20012-050 10×500 ml 查 询
20012-043 1,000 ml 查 询
PBS pH 7.2 (10X), liquid 70013-032 500 ml 查 询
PBS pH 7.4 (10X), liquid 70011-044 500 ml 查 询
RPMI Medium 1640 (1X), liquid (contains L-glutamine) 11835-055 10×500 ml 查 询
11835-030 500 ml 查 询
Trypsin-EDTA (0.5% Trypsin, 5.3 mM EDA 4·Na) (10X), liquid 15400-054 100 ml 查 询
Trypsin 2.5% (10X), liquid 15090-046 100 ml 查 询
Versene 1:5, 000 (1X), liquid 15040-066 100 ml 查 询
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 小中大
重组蛋白酶 (rProtease)

● 一种非动物来源的胰蛋白酶替代物
● 降低风险
● 无血清研究和生物生产中理想的细胞分离试剂
● 很容易获得各种获得任何规模的供给
● 简化下游纯化


GIBCO™ rProtease 是Invitrogen 不断增加的无血清培养基和非动物来源试剂行列中的新成员，它们用于药物发现研究和生物生产。这些创新的细胞培养工具最小化了来自动物病原体的潜在风险，并且消除了许多与动物来源物质相关的问题。

微生物生产的胰蛋白酶替代物

牛或猪来源的胰蛋白酶在细胞培养研究和生物生产中广泛的使用，用来从表面分离贴壁细胞。研究者和生产者希望确保哺乳动物细胞培养和生物生产过程没用动物来源物质，现在他们可以用微生物生产的GIBCO™ rProtease代替胰蛋白酶。已经证明这种类似胰蛋白酶（trypsin-like）的酶对许多种不同的细胞系有效（图1）。

细胞系 培养基 细胞释放要求的平均时间 平均活性
VERO VP-SFM 100％ 5 分钟
VERO E-MEM+5%FBS 100％ 8 分钟
VERO OptiPro™ 98％ 7 分钟
PK-15 E-MEM+10%FBS 98％ 27 分钟
PK-15 OptiPro™ 99％ 11 分钟
MDCK OptiPro™ 98％ 28 分钟
MDBK D-DMEM+5%FBS 100％ 15 分钟
A549 D-DMEM+10%FBS 98％ 9 分钟
293F D-DMEM+5%FBS 97％ 2 分钟


GIBCO™ rProtease是一种微生物生产的动物胰蛋白酶的替代物。它是在一个受控制的、完全没用动物和人类成分的发酵过程中生产。这个过程生产出极其纯的试剂（图2）。


图2 HPLC 层析A 图示标准胰蛋白酶的典型结果。注意表明有杂质的多个峰。HPLC 层析B 清楚地显示rProtease的纯度。


很容易得到任何规模的GIBCO™ rProtease源材料的供给，不象其它非动物胰蛋白酶替代物的源材料，例如植物来源酶，依赖于种植周期，并受到转基因作物的环境法规的影响。

GIBCO™ rProtease保持细胞的活性、产量和形态（图3-5）。无论应用在无血清或有血清系统，rProtease都显示了与胰蛋白酶相同的性能和稳定性，而且在许多情况下，它更加容易使用。由于可用新鲜的培养基灭活，因而不需要胰蛋白酶抑制剂。此外，rProtease中没用酚红，这种pH指示剂可能会呈现类雌激素（estrogen-like）特性，因而可能对某些类型细胞产生毒性。


图3 VERO(非洲绿猴肾细胞)以3.5×10细胞/25cm²在补充4mM L-谷氨酰胺的OptiPro™培养基中铺板。D-PBS清洗细胞后，每个T-25培养瓶中加入1ml rProtease或猪胰蛋白酶。在细胞从表面脱离时，1000rpm离心5分钟。进行细胞总数和存活率记数。发现在所有的情况下，细胞存 活率大于大于97％。细胞接种进新的培养瓶，并且重复分析6次连续性传代。



图4胰蛋白酶收获。MDCK细胞生长在GIBICO™ OptiPro™ SFM中，收获但是没有离心。细胞再次铺板，24小时后观察形态。用动物胰蛋白酶收获的细胞没有贴壁或延伸。
图5 rProtease收获。MDCK细胞生长在GIBICO™ OptiPro™ SFM中，收获但是没有离心。细胞再次铺板，24小时后观察形态。用rProtease收获的细胞贴壁或延伸良好。
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订货信息 Description Formula No. Size Price
rProtease 12563-011 100 ml 查 询
Non-animal, recombinant trypsin substitute used lfor the dissociation of attachment-dependent cell lines. 12563-029 500 ml 查 询


高级D-MEM和MEM

● 减少FBS的添加50-90％
● 节省时间和花费
● 延长血清批次的寿命
● 减少不同批次导致的差异
● 适合种类广泛的细胞系


GIBICO™高级D-MEM和MEM是在标准的基本配方基础上富集了血清中的正常组分。新培养基使这些组分参与细胞培养，减少50-90％FBS的添加，而不改变细胞生长、促进、形态或功能。高级配方适合多种普通细胞系的生长和维持包括MDBK、HEp-2、A549、MDCK、WI-38、VERO及其它细胞系。

每一种培养基都是在公开的标准基本配方中进一步添加NEAA和丙酮酸钠。添加下列成分可以减少血清：乙醇胺、谷胱甘肽（还原型）、抗坏血酸磷酸、胰岛素、人（holo）转铁蛋白、AlbuMAX® (一种富含脂的牛血清白蛋白)和微量元素盐亚硒酸钠、matavanadate ammonium、硫酸铜和氯化钨（maganous chloride）。血清使用浓度的降低将会随细胞系和使用的基本培养基的不同而有所变化。尽管推荐的血清浓度是1-5％，但是对于每一个细胞系，血清浓度必须要调整，以获得最佳的结果。对于大部分的应用，减少至少50％血清添加物不需要适应步骤。进行转换时，只需要简单的离心细胞，除去上清液，在减少血清的培养基中再次悬浮细胞。通过最小化的适应实现减少血清的添加。

提供1X液体形式的高级D-MEM和MEM，只需要添加L-谷氨酰胺或GlutaMAX™-I添加物。不要求细胞系适应这些培养基。


图1和2 添加4mM L-谷氨酰胺和1％FBS的高级D-MEM与添加4mM L-谷氨酰胺和10％FBS的Dulbecco's Modified Eagle's Medium (D-MEM)比较。高级D-MEM不进行预适应，A549(人肺肿瘤)细胞以2.5×10细胞/25cm²的密度铺板。培养瓶在37℃、5％CO2和95％空气中孵育一个4天的传代周期。在两种条件下，细胞的生长和形态是相似的。


Advanced D-MEM Applications Cell Types Recommehded Seed Density(Viable cells/25cm2) % FBS in Advanced D-MEM
A549 2.5×10 1-2
COS-7 2.0×10 1-2
MDBK 1.0×10 1-2
MRC-5 5.0×10 2
VERO 1.0×10 1-2



图3 添加4mM L-谷氨酰胺和10％FBS的Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium (D-MEM)与添加1或2％FBS的高级D-MEM比较（细胞系依赖）。各种细胞系铺板两份，接种密度的变化范围是1.0-5.0×10细胞/25cm2培养瓶（接种密度细胞系依赖）。培养瓶孵育在37℃、5％CO2和95％空气，经过至少传3代，传代周期是3-天：4天，再孵育4天。数据表示连续培养第4天传代培养物的平均值。
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出色的研究以出色的细胞培养开始

良好的细胞培养始于GIBICO™的产品和服务。

作为世界最大的细胞培养产品生产商，GIBICO™培养基、血清、试剂和技术支持已经制定全球标准40年了。全世界的科学家信任我们的质量，依靠我们的服务和欢迎我们的创新，现在通过整合Invitrogen的分子生物学工具甚至更加强大。

留心Invitrogen的方法，它们将会节省您的时间和花费，满足您变化的需求和改善您的实验结果。

Advanced MEM Applications Cell Types Recommehded Seed Density(Viable cells/25cm²) % FBS in Advanced MEM
HEp-2 3.0×10 2
MDCK 1.0×10 2
PK-15 2.0×10 1-2
VERO 1.0×10 1-2
WI-38 4.0×10 2



图4 添加4mM L-谷氨酰胺和10％FBS的Minimum Essential Medium (MEM)与添加1或2％FBS的高级MEM比较（细胞系依赖）。培养瓶孵育在37℃、5％CO2和95％空气，经过至少传3代，传代周期是3-天：4天，再孵育4天。数据表示连续培养第4天传代培养物的平均值。
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无血清培养基及应用
BIOMANUFACTURING BULLETIN
适应无血清细胞培养
论文：无蛋白培养基中的杂交瘤细胞的生长和抗体产生
论文：用限定化学成分培养基培养CHO细胞生产重组蛋白
GlutaMAX™——最小化有毒性氨的产生
新型高级颗粒化技术培养基础（Advanced Granulation Technology™）
哺乳动物细胞和昆虫细胞
新型的FreeStyle™ 293表达系统
无酚红培养基
重组蛋白酶（rProtease）
高级D-MEM和高级MEM
第三章 无血清和无蛋白培养基

一个成功的企业，必定具备高瞻远瞩的战略眼光。在血清产品受到广泛欢迎，稳居市场占有率第一的情况下，GIBCO 即开始研制无血清培养基产品，这是基于对人类和动物保健品安全性的长远考虑。由于占据了市场先机，GIBCO 理所当然地成为无血清培养基生产的领先者。针对各种细胞如CHO细胞、淋巴细胞、杂交瘤细胞、昆虫细胞等的无血清培养基相继问世，并且发展了完全不含蛋白质成分的无蛋白培养基。而被称作Chemical Defined(化学限定的)的无动物来源培养基的问世，则标志着细胞培养基发展的至高境界。这种明确每一种化学成分、无任何动物来源组分的培养基，消除了对培养基生物安全性的任何担忧。
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发表于 2012-3-18 12:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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无血清培养基及应用

无血清培养基是设计用来在无血清条件下生长特殊类型的细胞或进行专门应用的培养基。无血清培养基的使用体现了一种重要的工具，它允许细胞培养在一套限定的条件下进行，尽可能免于干扰参数的影响。

使用无血清培养基的优点 ● 增加确定性
● 性能更加一致
● 容易进行纯化和下游加工
● 细胞功能的精确评估
● 增强生长和/或产量
● 生理反应性的较好对照
● 增强细胞内中介物的检测


某些应用可能需要添加生长因子和/或细胞因子。

小 结：

无血清培养基——培养基中没有添加血清，但是它们可能包含个别蛋白或大量蛋白组分。

无蛋白培养基——培养基中没有添加蛋白，但是仍然可能包含一些动物或植物来源的成分（例如，提供低分子量肽的各种水解物）

化学限定培养基——培养基中不包含有蛋白、水解产物或未知结构的组分。所有的成分均有已知的化学结构。
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