细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]免疫细胞荧光图象重叠:达到激光共聚焦效果

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]免疫细胞荧光图象重叠:达到激光共聚焦效果

u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
11
 
好象未见类似帖子,我还是请教国外同事才知道这个方法的。
希望此帖子对没有激光共聚焦显微镜的战友有帮助

————————————————————————————————————

这个类似,当然Ajust部分没有
记得还见过一个教程,暂时没找到,不过不管怎么说,首先感谢您提供的教程
顶部
october7[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77254
精华 0
积分 448
帖子 616
信誉分 100
可用分 3856
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
12
 
给出一张衰减到原先荧光1/16的图片(推进一块)


查看积分策略说明
附件
2012-3-18 13:07
65521380.snap.jpg (28.45 KB)
 
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
13
 
贴出的衰减到1/16的图就能说明了(此图显色强的地方,在先前图中发橘黄;此图显色弱的地方,在先前图中显正常红色。)
很简单荧光信号太强的缘故。而造成信号太强的缘故是抗体浓度过高或者是拍照时衰减片没有推进去。
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
14
 
先申明一下,不是跟您抬杠

若衰减到1/16,有无可能会掩盖原本具有的反差
因为您给出的照片中细胞的荧光强度不是很均匀,所以想您请教一个问题:
就是,若两组细胞荧光反差很大,这种情况下可能会出现我刚才提到的假阳性的cocolocalization吗?特别是红色+绿色时?
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
15
 

回复 #14 u234 的帖子

确实存在你讲这个问题,最近我做了很多次免疫细胞化学。拍照时,你选择不同的荧光衰减强度,获得的信息是不同的。
另外可能与数码成像有关。我们知道洗普通照片时,不同照相馆洗出的照片不同。有的偏红,有的偏兰。总之就是对某一种颜色可能出现偏差。
关于红色+绿色没有做过。但是我想没有很多人支持我图片中的黄的地方是红色+绿色的叠加。尽管我没有做过红色+绿色,但是我想不应该是那种橘黄。
正如你所说细胞的荧光强度不是很均匀。但是我们见到的很多文章,往往只给出少量几个细胞的荧光图,因此很容易掩盖整个细胞荧光强度不均匀。
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
16
 
确实存在你讲这个问题,最近我做了很多次免疫细胞化学。拍照时,你选择不同的荧光衰减强度,获得的信息是不同的。
另外可能与数码成像有关。我们知道洗普通照片时,不同照相馆洗出的照片不同。有的偏红,有的偏兰。总之就是对某一种颜色可能出现偏差。
关于红色+绿色没有做过。但是我想没有很多人支持我图片中的黄的地方是红色+绿色的叠加。尽管我没有做过红色+绿色,但是我想不应该是那种橘黄。
正如你所说细胞的荧光强度不是很均匀。但是我们见到的很多文章,往往只给出少量几个细胞的荧光图,因此很容易掩盖整个细胞荧光强度不均匀。

————————————————

好像是这样的:
7.5%红+92%黄+0.5%蓝=橘黄
顶部
园丁##[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 74049
精华 0
积分 1981
帖子 3179
信誉分 101
可用分 16786
专家分 10
阅读权限 150
注册 2011-10-4
状态 离线
17
 

回复 #16 u234 的帖子

好像是这样的:
7.5%红+92%黄+0.5%蓝=橘黄
=================================
你是这样计算出来的,向你好好学习一下.
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
18
 

回复 #17 园丁## 的帖子

不是啊,我是从某种颜料的配方中摘录的

所以,我估计,您说的可能更加合理
顶部
白白的[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
19
 
这种做法简直就是掩耳盗铃, 只是让图像让外行看起来像共聚焦图像而已,其反而丢失了灰阶信息, 使图像缺乏层次,共聚焦的图像不仅仅是看起来亮而清晰,其实本质上在于其高对比高解析度, 像上面这种处理方法得出的图像只是相当于把反差增强了,信号和噪音一起增强,并没有使图像的可分辩信息增加.
正规的做法是对普通显微镜的图像进行逆卷积运算,才能得到接近共聚焦效果的图像. 透镜的成像过程就相当于对物体进行卷积运算得到物体的像,因此,理论上对像进行逆卷积运算就可以得到物体的原始信息.
逆卷积运算必须用专业图像处理软件才可以实现,比如ImageProPlus,MatLab,IDL等
顶部
u234[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77031
精华 0
积分 691
帖子 1081
信誉分 100
可用分 6196
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
20
 

感谢楼上的参与讨论,并指出其缺陷,

但,楼主的方法并不是让照片看上去分辨率等方面有所改进,主要是利用来进行图片叠加而已,形成“伪”confocal的效果(只是照片上的),据我所知,国外著名大学的研究机构内也有用此方法的

另外,能否请介绍一下“逆卷积运算”?
顶部