细胞世界

1.如何用PS8.01来合成两张不同色的荧光照片?园子里介绍的那种方法(用拷贝)效果不佳.

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在photoshop中合成照片很简单，就是在大一点的照片上加一个图层 ---- 直接粘帖另一张照片就行，这就形成的有两个图层的PHotoshop格式的图片，然后在图层工具栏里找那个透明度选项，如果是100%透明，就能合成显示两张图了，通过调整透明度，还可以变换两张照片的亮度比例，效果能好看一些。最后合并图层保存。

2.请问:绿色跟蓝色叠加在一起成什么颜色?

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2.电脑里的纯蓝色与纯绿色相加的颜色是湖蓝色。你也一样可以用图层迭加的方法直接看。

3.带CCD的荧光显微镜(接电脑,用软件拍照的),在观察荧光时,曝光度,时间,敏感度,像素,各种平衡,如何设置?

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拍摄荧光照片时，最重要的是不能使用自动曝光，要用手动曝光，要注意画面中最亮的亮点不能有光晕，或者有颜色变黄的现象，这些都意味着曝光过度，颜色与强度都会失真的。在不得不使用自动曝光时，要把曝光调整(adjust expose)调到-4，就是降低两档曝光，也就是时间降低至正常的1/4。
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如果用的是彩色CCD，还要想法把自动白平衡给关掉。否则颜色失真也会很大，会降低色饱合度 -- 最要命是的关掉白平衡后拍摄的画面似乎与镜下效果不同，颜色似乎更深一些，其实这是人眼的视觉误差。很多人更愿意把白平衡开着，如果是单色荧光样品，也就罢了，但在双染色的样品时，色饱合度高一点是绝对有好处的。
各种数码相机与CCD的操作都有所不同，具体的操作设置还得自己在说明书上找。把握住三条:一是正确曝光，二是处理好白平衡，三是一定要使用有效象素大小拍摄。一般的CCD有效象素也就一百万左右。拍摄成五六百万的格式时很可能还会更模糊。如果电脑硬盘够大，尽量保存TIFF格式图片。BMP太大，jpg格式会有颜色细节的损失，会影响光密度分析的准确性。

关于显微镜的操作可以写上一大堆帖子，只是不知在哪里贴它们比较合适。

这种做法简直就是掩耳盗铃, 只是让图像让外行看起来像共聚焦图像而已,其反而丢失了灰阶信息, 使图像缺乏层次,共聚焦的图像不仅仅是看起来亮而清晰,其实本质上在于其高对比高解析度, 像上面这种处理方法得出的图像只是相当于把反差增强了,信号和噪音一起增强,并没有使图像的可分辩信息增加.
正规的做法是对普通显微镜的图像进行逆卷积运算,才能得到接近共聚焦效果的图像. 透镜的成像过程就相当于对物体进行卷积运算得到物体的像,因此,理论上对像进行逆卷积运算就可以得到物体的原始信息.
逆卷积运算必须用专业图像处理软件才可以实现,比如ImageProPlus,MatLab,IDL等

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还有一个问题：两种颜色的叠加效果有时候共聚焦都很难区分：因为染料浓度不同，染料和被测物的结合效率不同，共聚焦上的激光能量不能保证完全相同——即使是同一种百分比！——所以用一般显微镜拍出来再进行叠加的照片不完全是cocolocalization，很可能是串色。

其次就是清晰度的问题了。
共聚焦的清晰度，一般显微镜很难相比的。