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我们实验室是做癌细胞的，每次冻存效果还不错，具体过程如下：
1 消化培养瓶内的细胞，收集到离心管中。
2 1000rpm离心5-10min，弃上清。
3 用冻存液将离心管内的细胞沉淀打散，分装至冻存管，1.5ml每管。一般一支冻存管冻存一瓶细胞。
4 冻存管用消毒的封口胶封住，避免复苏时细胞溅出，导致污染。
5 4度放置30min，-20度放置30min-1h。
6 脱脂棉包好，贴标签著名细胞株及冻存日期，放入-80度长期冻存。
冻存液的配方：1.5ml 75%的高压灭菌的DMSO+9ml 含10%FCS 的RPMI1640培养基。
细胞冻存的原理：在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，从而减少对细胞的伤害，使细胞受到最大限度的保护。
细胞冻存的细胞冻存方法大致上是相同的，理想的是采取梯度降温，可根据自己的具体条件加以调整。4度及-20度放置时间不可过长，对于-20度来说，30分钟和更长时间没有区别。-20℃时间过长，会形成过大冰晶，造成细胞大量死亡。
