小中大回复 #366 tangxin_80 的帖子
我现在正在做转染,经过几次的摸索条件,觉得已经可以顺利的完成这个过程了。转染的时候,我使用的是qiagen公司的大提kit(tip100),主要是靠重力来收获质粒,它的纯化级别可以达到转染,量度可以达到800ng/ul以上。我在附件中会附它的使用说明书,你可以仔细阅读。我自己也曾经试过用omega公司的小提质粒kit,但是转染效果很差的,因为质粒的纯度会严重影响的效率。只要你的质粒浓度达到500ng/ul就可以转染了,你的小提浓度太小,根本就不行。
当然你尝试作的浓缩质粒也是可以的,自我认为你质粒溶解后的白色悬浮物应该是你的质粒抽提蛋白的时候不彻底,很多都是蛋白,这样的质粒对于转染很不利,除了内毒素,蛋白和RNA的存在影响也很大。
质粒大提kit,可能有点贵噢。