小中大【求助】关于k562细胞的培养及形态
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本人第一次作细胞培养,诚惶诚恐,细胞培养的书看了不老少,培养的细胞也是据说很好培养的肿瘤细胞K562,但还是遇到不少问题,请各位高手指教:
------我的培养过程:6天前下午自细胞所拿来细胞株,未作处理酒精擦瓶后放入培养箱,过夜后,观察细胞发现细胞大小不一(请教了细胞所的老师说其形态是这样),作了活力为85%,实验室做干细胞培养的老师帮我做了个离心涂片,并常规染色,发现细胞胞浆很不规则-,有伪足----形象点描述是不少细胞都长了小耳朵(圆圆的,就象细菌出芽!可惜未能拍陈照片,不然可以让大家看看)----好像细胞所没做过问他们也不知道。于是将细胞由原来的25ml的玻璃瓶换为我们的一次性50ml的大瓶,加入了新的培养基(用的是GIBCO的1640加入10%胎牛血清),第二天发现细胞长得不少,可见白色絮状物(更有点像烧开水后的白色沉渣,粉状的),但离心计数细胞并不太多,分为两瓶,各加入新鲜培养基10ml,三天后,细胞长得很多,有很多肉眼可见的白色沉淀,摇晃后培养也挺混,镜下看细胞很多,有不少个头挺大的细胞,还有很多细胞形态不规则(好象有些破了),折光性也不好,倒没见有明显的污染情况。
请教:1、正常培养的活力好的k562细胞是什么样的形态?是大小差别很大吗?有没有人观察过这个培养细胞染色后的形态?我的细胞染色后的形态(有伪足)是正常吗?
2、细胞形态不好是我的培养过程有什么问题吗?是细胞换了环境发生的改变?还是污染(应该不会因为这些步骤都是实验室的老师帮我做的,我还未敢动手,所以污染的可能性还小些。)?
3、下一步我该怎么办?是再培养看看?或是在重新购株(哎心痛银子,不到万不得已实在不想用)?
请大家帮忙分析指教一下