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标题:[未解决]可以用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白吗？

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
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发表于 2013-6-22 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白吗？

我用水提取的蛋白、碱提取的蛋白、盐提取的蛋白冷冻干燥后的粉末，是不是要再用提取时用的溶剂把它们重新溶解然后才能用福林法测蛋白质含量，还是说用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白（我想是前者，大家说呢）？
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兜兜[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我做过类似的试验，之前沉淀是用蛋白质等电点来做吧?沉淀出来最后用元提取剂溶解再测定就好
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mr.henry[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以咨询下你用盐提取蛋白质的具体放方法吗，我最近在做这方面的实验，却找不到哪里出了问题，提取不到蛋白
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发表于 2013-6-22 16:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
白鲢中的盐溶性蛋白，提取条件为：Nacl 0.5mol/L,PH 6.0,提取时间为24h，温度 0--4度，最后做过单因素实验，只在盐浓度0.3摩尔每升才有，而且超低，为0.6%多……
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发表于 2013-6-22 16:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
4倍体积的0.1mol/L，PH 7.4的PB(含1.1mol/L的NaCl), 匀浆1min，4℃抽提18h（不时搅拌）10000r / min,20min,4℃离心
这是我的方法，要提18h
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发表于 2013-6-22 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反正做实验的时候就发现，基本相同实验步骤，实际做的却和人家参考文献差别很大……问一小白的问题：PB，是什么东东？，匀浆的时候转速没要求吧，谢谢了啦
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冰@舟[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PB是磷酸盐缓冲液，那你提取的时候PH设为多少，像你之前做的小虾和对虾的蛋白质溶液本身PH应该是酸性，那就是应该在碱性环境中提取效果较好，对吧
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XXXX111[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
温度0-4度，干吗选这么低的温度，保持蛋白活性？
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差不多先生[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那干吗不稳定高一点直接让蛋白酶变性掉，而且温度高一些提取也更快
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孤独的渔夫[使用道具]
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发表于 2013-6-22 16:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
之前没考虑过，温度低提取时间长一些就行，再说还抑制微生物……我们要接下来研究盐溶蛋白的功能特性，并开发产品，不能失活，你也在做类似的实验吗，有什么好的方法，交流一下
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