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标题:[未解决]挑取了单菌落做菌保表达蛋白不行是怎么回事？

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发表于 2013-8-31 15:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

挑取了单菌落做菌保表达蛋白不行是怎么回事？

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我将质粒转入肠杆菌表达菌株，涂板，挑取了单菌落做菌保，表达蛋白，开始表达的很好，后来隔了一段时间（一个月左右）拿菌保出来做表达，无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低，很费解。求高手指导
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发表于 2013-8-31 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个是正常的，随着传代的增多质粒会慢慢丢失，菌种本身也会退化，哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选，类似于自然选育的工作，纯粹是体力活。
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发表于 2013-8-31 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上说的对，蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化，如果你隔了一段时间仍要大规模表达，最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
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发表于 2013-8-31 15:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
重新转化。我试过把已有菌种重新涂板没有明显效果。菌种在-80度冻过之后，质粒表达会受到明显的影响，即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显，所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化，此条切记！
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发表于 2022-9-19 09:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个是正常的，随着传代的增多质粒会慢慢丢失，菌种本身也会退化，哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选，类似于自然选育的工作，纯粹是体力活。 https://1687660.com/view/jisusaiche/pk10kai.html
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