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标题:[未解决]PMSF是抑制蛋白质降解的啊对吗？

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化小样[使用道具]
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发表于 2013-8-31 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PMSF是抑制蛋白质降解的啊对吗？

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请教各位大神们，PMSF溶解在丙三醇中，在最终的蛋白质提取缓冲液中PMSF浓度为1mmol/L，对所提的蛋白质有没有影响啊？
我最开始做实验时用到的浓度为微摩尔级，当时是溶于水中，跑非变性胶考染还有条带；后来加到1mmol/L，溶于丙三醇中，跑非变性胶考染竟然没有条带了，按理说，PMSF是抑制蛋白质降解的啊，对于这个结果，百思不得其解啊！
期待大家的回复帮助！
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明灰灰[使用道具]
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发表于 2013-8-31 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
在我的实验里，PMSF在较低浓度时不影响两个酶的水解活性，只是随着浓度提高，对酶的水解活性抑制效果越大，也可能是能够使蛋白质发生不可逆变性，或者甚至是降解。你看看我的计算，我的称量应该是正确的。由此可见，可能是你的实验情况特殊，你的蛋白质比我的两个酶脆弱得太多，也可能是你的哪一步操作出错，比如说PMSF失效，或者那个浓度还不足以抑制蛋白酶，或者加了PMSF之后还放置过久等，但不可能猜得出具体是什么原因造成的。如果是你的蛋白质有什么活性的，建议你就测一下看看那个活性有没有减弱，再看看什么步骤出问题。
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发表于 2013-8-31 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
PMSF是抑制丝氨酸蛋白酶活性，但不会降解蛋白，所以你蛋白条带的消失绝对不可能是由于PMSF的加入引起，相反，由于PMSF在水中很不稳定，如果你不是每步都加入新鲜的话反而容易导致你的蛋白降解！Good luck！
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发表于 2013-9-1 11:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你提的蛋白是动物蛋白还是植物蛋白？PMSF抑制酶的活性比较综合，我一般都是溶在甲醇里面，然后再加放适当比例的胰蛋白酶抑制剂和胃蛋白酶抑制剂（环境中这两种酶较容易污染）
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mico_11[使用道具]
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发表于 2013-9-1 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的酶都是纯化后的纯酶，没有加过蛋白酶抑制剂，放两个月没问题。可能是你的酶不纯。
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发表于 2022-9-12 11:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你提的蛋白是动物蛋白还是植物蛋白？PMSF抑制酶的活性比较综合，我一般都是溶在甲醇里面，然后再加放适当比例的胰蛋白酶抑制剂和胃蛋白酶抑制剂  https://1687660.com/view/uklotto8/klsf_index.html
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