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低温肯定降低细菌生长速率,而加入IPTG以后菌体生长也是必然会受到抑制。这一方面来自IPTG的细胞毒性,另一方面来自自身能量和物质的分配。诱导开始以后,在同样的比消耗速率下(也就是吸收相同的碳源氮源等等),要分出一大部分来生产外源蛋白,细菌还能利用多少营养来繁殖自己呢?所以“菌体没有明显增多”是正常的。
如果你做过生长曲线,特别是发酵的生长曲线,就会很清楚了。建议做一下,OD对time,或者湿重对时间作图。一般做发酵的,特别是发酵调控的话,这个是必须的。
关注两点。
一是你在什么时候加诱导剂。在OD的多少时候诱导,可以取决于你的蛋白对细胞有无毒性,是否会影响到细胞的增殖。
二是诱导多长时间。也就是下罐的时间,对于摇瓶来说就是收菌的时间,取决于你的细胞什么时候老化死掉,或者你的蛋白什么时候开始降解。因此需要对诱导之后每隔一段时间(比如1-2小时),取样,最后把所有的样品一起做SDS-PAGE,一般可以看出你的目标蛋白随着时间在增加,到某个时间达到最大,然后开始降解,从而优化你的发酵时间。