【求助】】水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上...

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• bling (2014-2-08 22:37:18)

  你是指的上样前吧？我们一般是水浴变形之后在室温下平衡5 min左右，然后离心，再上样电泳。至于放在4度，应该也是没有问题的。但我看的几个大公司的WB操作指南都是放在室温下。

• douding66 (2014-2-08 22:37:52)

  QUOTE:

  原帖由 nvdabing 于 2014-2-8 22:36 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  水浴变性后，在上样前，样品应该置在冰上还是室温条件下？就是有关再次复性的问题。请赐教，多谢了

  放到室温下冷却就行，没有必要非要放到冰上。
  蛋白用上样缓冲液煮沸变性，我觉得应该是个化学变化吧，所以应该不能够复性了。

• TAT (2014-2-08 22:38:14)

  
  应该是在室温下，如果在4度的样品则需要在室温下平衡一段时间，主要是让低温析出的sds溶解。

• birdfish (2014-2-08 22:38:34)

  
  楼上说的有道理。室温比较合适。

• greenbee (2014-2-08 22:39:00)

  
  室温 如果样品保存在-20度一段时间后再上样 理论上应该再煮沸1-2分钟再上样 以防SDS析出

• dmg (2014-2-08 22:39:20)

  
  推荐放室温吧
  至于煮沸前所有操作在冰上 目的是防止目标蛋白被降解
  煮沸后 所有蛋白变性 当然包括蛋白酶了
  至于放冰上，低温很有可能导致SDS析出。。。

• nvdabing (2014-2-08 22:39:39)

  
  多谢各位的热心帮助了。今天我上样前还是放置在冰上了，不知道SDS析出是什么表现？因为今天跑电泳时出现了2个异常现象，1.就是溴酚蓝跑到最下面时颜色变红了，2.还有就是跑完第一阶段电泳后，发现电泳带拉的很长，不是像以前那样电泳带压的很扁平成一条直线。SDS析出会影响与蛋白质充分接触吧？这样的话蛋白就不好转到膜上了吗

• sunnyB (2014-2-08 22:40:02)

  sds析出 会有什莫样的影响啊 影响蛋白峰度？不明白