查看完整版本请点击这里:
【求助】配PAGE胶时,下层凝,上层不凝
【求助】配PAGE胶时,下层凝,上层不凝
各位大虾
我在配SDS-PAGE胶时,分离胶凝的很好,浓缩胶怎么弄也不凝,是怎么回事啊,除了两者的缓冲液不一样,其他的都一样。有大虾遇到类似的情况吗?Help!!
查看完整版本请点击这里:
【求助】配PAGE胶时,下层凝,上层不凝
【求助】配PAGE胶时,下层凝,上层不凝
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-18 10:42 作者: tuomu45 来源: 分析测试百科网
最新回复
mimili_901 (2014-6-18 10:42:55)
一是不是APS或者TEMED没有加?
二用的缓冲液是不是时间太长了,PH值已经不准了?
33号 (2014-6-18 10:43:17)
可尝试将AP和TEMED加倍!
remenb (2014-6-18 10:43:56)
1.大多数情况下是APS问题!
我的APS都是小份分装,-20度保存,只冻溶一次就仍掉!
2.上层胶稀,APS可多加1/5体积,耐心点等,要30min!
49888 (2014-6-18 10:44:14)
上层不凝你看看它和不同下层不同的试剂
我认为只要是tric-hcl
你把你制胶配方发上来看看
tuomu45 (2014-6-18 10:44:33)
我也怀疑浓缩胶缓冲液(tric-hcl,PH6.8)有问题,重新配了,其他试剂与分离胶公用,应该没有问题,每次分离胶都能凝,而浓缩胶无论4度,37度,室温过夜都凝不好。而且现象实在是怪,浓缩胶梳子下面可以凝,但梳子之间却不凝,(已经多次了,排除未混匀),所以无法形成齿,没法上样啊,APS,TMED均加倍也无用啊。正准备灌入琼脂以形成孔
guagua (2014-6-18 10:45:14)
我前一段也碰到和你一样的情况,分离胶凝的很好而浓缩胶梳孔之间的胶不凝。最后换了APS就好了。强烈建议你换APS试试!
831226 (2014-6-18 10:45:51)
如果别的试剂都没问题aps和temed再多加些,
我有几次一次aps加80-100多u才会凝
gogo (2014-6-18 10:46:10)
相关疾病:
头痛
我现在也正为出现了这样的问题而头疼呢!分离胶能凝的话就不应该是APS的问题了啊,不过我把封条去掉以后分离胶底部总是有很多的水。我用的ACR贮液是2005年12月份的19:1的水剂,不知道是不是凝胶贮液的问题呢??
gogo (2014-6-18 10:46:31)
我也怀疑浓缩胶缓冲液(tric-hcl,PH6.8)有问题,重新配了,其他试剂与分离胶公用,应该没有问题,每次分离胶都能凝,而浓缩胶无论4度,37度,室温过夜都凝不好。而且现象实在是怪,浓缩胶梳子下面可以凝,但梳子之间却不凝,(已经多次了,排除未混匀),所以无法形成齿,没法上样啊,APS,TMED均加倍也无用啊。正准备灌入琼脂以形成孔
======================================================================================================
请问一下楼主 :你的问题后来是怎么解决的啊?我现在遇到了你一样的情况,我怀疑是我的凝胶贮液的问题,今天重新配置了,准备试一下.
但是我的分离胶,浓缩胶buffer 均放置了一个月的样子,不知道对凝胶有没有影响呢???
any333 (2014-6-18 10:46:51)
APS过期的可能性最大。以前我也做实验也出现过这种情况,当时我也以为既然分离胶都凝了APS应该不会有问题,但实际上就是它的问题。换过就好了。当时的情况是分离胶凝而浓缩胶凝不好(有时一块一块的,有时全不凝,有时梳子下凝)。
重配一下APS。
gogo (2014-6-18 10:47:16)
【求助】配PAGE胶时,下层凝,上层不凝