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【求助】浓缩胶出问题了
请教各位大侠：【求助】浓缩胶出问题了
我作的SDS－PAGE
分离胶10％，浓缩胶5％
灌完分离胶后1h，灌浓缩胶，加梳子。放了20多分钟后，浓缩胶胶面回缩的十分严重，制成的加样孔只有正常的一半高度。重复了2次，问题仍然没有解决。根本无法上样。
请教各位有经验的大侠。
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【求助】浓缩胶出问题了
【求助】浓缩胶出问题了
字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2014-6-18 15:18 作者: misswu61 来源: 分析测试百科网
最新回复
whitesheep (2014-6-18 15:19:17)
我也出现过这种问题，不过回缩的程度小点，只会缩到1/3的样子，还是能上样的。但是后来我把浓缩胶的量配大点，把胶加高点，利用张力基本上超过薄玻璃板顶部0.5mm，再插梳子，插的时候我是从一边慢慢地倾斜的插进去，这样溢出的胶液会少点。可能效果好点
具体的原因有可能是你的所用试剂放得太久了之类的，要麻你把配胶的试剂全换了，再试试。
zhihui小新 (2014-6-18 15:19:38)
TEMED加得如果比较多，就会出现比较严重的缩胶
建议不用加那么多促凝剂，多等一些时间比较好，等个40分钟左右吧。如果着急，可以把胶放在30～40°左右的环境，比如烘箱，环境温度高一点凝固快一点
windy+++ (2014-6-18 15:19:55)
根据我的试验经验,我觉得有以下的原因:
(1)试剂的问题,主要是聚丙烯酰胺的浓度,浓缩胶的浓度和PH值.
(2)TEMED和过硫酸铵的添加量,太多的话好像会有类似的现象的.
(3)将制备分离胶时候用于压胶面的DDH2O倒掉以后,如果发现玻板有很多水珠的话最好用滤纸将水珠吸了.不要混的水多了,自然在加入浓缩胶时浓度变低的.
好运.
whitesheep (2014-6-18 15:20:18)
我也出现过这种问题，不过回缩的程度小点，只会缩到1/3的样子，还是能上样的。但是后来我把浓缩胶的量配大点，把胶加高点，利用张力基本上超过薄玻璃板顶部0.5mm，再插梳子，插的时候我是从一边慢慢地倾斜的插进去，这样溢出的胶液会少点。可能效果好点
具体的原因有可能是你的所用试剂放得太久了之类的，要麻你把配胶的试剂全换了，再试试。
misswu61 (2014-6-18 15:20:37)
我试过了，APS和temed的量都减半了，回缩的现象还是很明显的呀
请高手们想想办法
我都无法上样了
#甜# (2014-6-18 15:20:53)
Arc是否加双叉的？
zhenxin (2014-6-18 15:21:23)
请高手们想想办法
我都无法上样了
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还是回缩吧？ 那是因为漏气！在冬天回缩不是很明显，一到夏天那就会很明显了
你看看你的梳子两侧那个隔气的小角还在不？ 你肯定是插完梳子就不管了，让胶自己凝去。。。这样不行的，插完后过半分钟左右再用黄枪头在梳子两侧的地方加些还没凝固的胶，这样反复加上3-4次，一般就会好多了
whitesheep (2014-6-18 15:21:40)
你插梳子的时候是不是没有完全查下去呢，我以前就去见过，不过梳子完全插下去就不会了，还有要是制了胶当天不用最好放在冰箱4度，要是还不行，那就只能你麻烦一点把剩下的胶补到缩回去的地方
flower-201 (2014-6-18 15:21:57)
最近为了赶时间，我也经常将APS和TEMED的量增加至10％左右，从开始配胶到加样，1h就可以搞定了，从来没有遇到过楼主所说的Smile
summerxx (2014-6-18 15:22:23)
我感觉如果"APS和temed的量都减半了，回缩的现象还是很明显的呀"
而且多次如此你插梳子应该也会很注意的.
压胶面的DDH2O倒掉以后,如果发现玻板有很多水珠的话最好用滤纸将水珠吸了.不要混的水多了,自然在加入浓缩胶时浓度变低的.
做了没有?
如果都已经做了,你的各组分添加量(体积浓度比)和PH值问题了.好好检查一遍.我有个师弟曾经按TAKARA的目录后的说明做胶,可是却按我的试剂配方配液,也就是那个缓冲液的浓度问题,结果缩的严重.不知道你是否有这样的错误.
misswu61 (2014-6-18 15:23:20)
我的浓缩胶比例是：5ml体系
三蒸水：3.4ml
30％ACR:0.83ml
1.0Mtrisph6.8:0.63ml
10%sds:0.05ml
10%APS:0.05ml
TEMED:0.005ml
前几天胶凝的太快，所以曾经把APS,TEMED的量减少，可是问题还是存在
wangp249 战友说的多次不叫的问题，我也试过问题还是存在
我后来又试过先放好梳子，再灌胶，也不行
请大家多指教
#甜# (2014-6-18 15:23:40)
你的体系和TAKARA上面的是完全一样的,我用过应该是没有问题的.
你还是自己注意一下你的试剂吧,要不然就按TAKARA目录后面的配方重新配一次试剂,总比你这样郁闷的好.
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