【求助】双向横纹

最新回复

• zsxan1990 (2014-6-21 09:33:48)

  
  这个你得把你的图传上来才好说，提供几个可能：
  1.胶条与胶之间没有很好的接触，这是造成出现横条纹的一个重要原因，虽然不是一定出现在酸性段。你做过重复试验吗？是次次都是酸性端的话这个可能就小了。
  2.不是你所说的横条纹是什么样子的？如果出现大面积的覆盖的话就有可能使核酸的影响。用核酸酶处理。
  看看有没有符合你的情况的。
  祝你试验顺利

• she (2014-6-21 09:34:09)

  
  有什么高见阿

  
  40516071.jpg

• she (2014-6-21 09:34:40)

  
  这是4-7的，3-10的整个都是横条纹了

• bluelake (2014-6-21 09:34:57)

  
  你是做什么菌的啊?
  你的3-10是否也发现碱性端点较少啊?

• she (2014-6-21 09:35:20)

  
  是阿，你做的什么菌阿，我做乳酸菌阿

• owanaka (2014-6-21 09:35:37)

  我也是才做2D的，碰到和你一样的问题，我估计原因如下：
  1，矿物油没有除干净，----用滤纸润湿后，多压下。
  2，两性电解质没有除干净，------染色前用TCA固定下。
  3，聚焦-----摸条件，看是聚集不足还是聚焦过度。
  4，样品溶解不好，lysis buffer的成分一定要够。
  5，平衡时间不要太长，引起蛋白扩散和蛋白丢失。
  1，2个原因可能性小点，主要问题可能在3，4，5上。
  做2D真的很辛苦，每一步都很关键，不容许出差错。要是做大胶的话，基本上每做一次都要熬夜。辛苦没什么，到是实验中，碰到的各样困难，不知道是那里出错，怎么解决，这真是让人沮丧。
  人累，钱花得多，实验结果差，哎！！！ 发下牢骚。
  祝成功！！！

• daod (2014-6-21 09:35:59)

  
  我做双向快一年了，也是碰到和你一样的问题:酸性端的横条纹,有时严重有时很少，但一直没有彻底解决.我摸索过很多条件,包括前面所有提到的.现在我认为主要和蛋白的溶解性相关,你的样品制备,从冰箱中取出化冻,和水化液混合后都要室温放置一个小时,保证蛋白充分溶解,样品上槽水化前用40000g离心半小时，保证未溶解的蛋白和大分子杂务完全沉淀.吸取离心后上清时动作轻一点，别把沉淀吸上去.
  另外，从图来看,你蛋白上样量可以再大一些。

• she (2014-6-21 09:36:20)

  
  谢谢，确实少了好多！

• she (2014-6-21 09:36:59)

  
  不过还想问个问题，我重新制的样品以后，跑的图，只有上半部分有点，小半部分，就是小分子量的部分，以前还有的，现在就没了，成了半个图了，郁闷。