【求助】3KD以下蛋白跑不出电泳

最新回复

• guagua (2014-6-21 09:43:24)

  
  用Tricine SDS-PAGE肯定跑得出来。
  因为我做过，对于1KD的短肽是有难度，但3KD的就很好作了

• 耗子=== (2014-6-21 09:43:43)

  可以试试夹层胶或者尿素胶
  我以前跑过7kd的 再低的就不知道怎么样了
  你可以试试看

• wawa (2014-6-21 09:43:58)

  
  我刚刚跑过了５ＫＤ大小的蛋白．完全可以的到很好的结果．你的配方是什么？好象有几种不同的protocol．
  还有你的胶跑别的小分子蛋白可以吗？如果不行．那就是你胶的问题了

• duoduo (2014-6-21 09:44:23)

  
  用Tricine SDS-PAGE也跑过了，还是没有跑出来，我们有一作7年蛋白的蛋白王子都没有u跑出来，他就是用的这种方法，还有就是20%浓度的胶液试过了

• duoduo (2014-6-21 09:44:41)

  用Tricine SDS-PAGE肯定跑得出来。
  因为我做过，对于1KD的短肽是有难度，但3KD的就很好作了
  
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  这个方法试过了，也没有成功。我看到有方法是提高丙烯酰胺浓度和加甘油，但不知具体方法。不知道是不是这个多肽有其他毛病，我刚接手这个东西，害怕呢，老板很凶，以前的人都挨批啊。

• vcve (2014-6-21 09:45:03)

  我的胶就要加甘油.效果很好。如果不行那是不是你的蛋白浓度太低了啊??我的分离胶49.5%T。6%C 。浓缩胶49.5%T。3%C

• flower-201 (2014-6-21 09:45:21)

  中国生物工程杂志上（2004年1月）有一篇曹佐武的文章，就是用5T＋3C的方法，加尿素可以跑到1K，一般的6T＋3C＋甘油的方法跑3K很清楚，我刚跑的。你要注意的问题是：阳极缓冲液、凝胶缓冲液的PH值(测Tris的PH值的探头和一般试剂的不一样，）丙烯酰胺在4度会沉淀，用锡箔纸包的时候不容易发现，用的时候在55度加热融解。我犯了这样两个错误，一直没有跑出来，注意一下，应该可以跑出来。

• duoduo (2014-6-21 09:45:44)

  
  谢谢你啊，你采用的是6T＋3C＋甘油的方法跑3K这个方法吗，前面的5T＋3C+加尿素的方法试过吗？你说的那篇文章我也下载了。我可以将用前面2方法同时做一下。

• duoduo (2014-6-21 09:46:00)

  我的胶就要加甘油.效果很好。如果不行那是不是你的蛋白浓度太低了啊??我的分离胶49.5%T。6%C 。浓缩胶49.5%T。3%C
  
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  你跑的蛋白是多大的，加多少甘油11%吗？可不可以把你的配方给我试试？
  多谢！

• duoduo (2014-6-21 09:46:18)

  我的胶就要加甘油.效果很好。如果不行那是不是你的蛋白浓度太低了啊??我的分离胶49.5%T。6%C 。浓缩胶49.5%T。3%C
  
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  也是配的3段胶“小孔胶+ 夹层胶+ 浓缩胶“还是 2段”分离胶+浓缩胶“。我看你的方法可能是2段胶，还有中间有需要注意的问题吗？比如PH，电极缓冲液等。不好意思，多多麻烦了。

• linlinstar (2014-6-21 09:46:38)

  
  堆积胶 0.16ml 丙烯先按 (49.5%T。3%C)
  0.5ml gel buffer (3M Tris.cl 0.3%SDS ph8.45)
  1.34ml ddw
  10ul 10% APS
  4ul TEMED
  分离胶 2ml 丙烯先按 (49.5%T。6%C)
  2ml gel buffer (同上)
  0.62 100%甘油
  1.38 ddw
  40ul 10% APS
  8ul TEMED
  阳极电泳缓冲液 0.2M Tris.cl ph 8.9
  阴极缓冲液 0.1M Tris.cl 0.1M tricine 0.1%SDS PH8.25
  以上就是我的胶的配方.祝你实验顺利