小中大求助】扩增曲线不平滑，请QPCR高手帮助分析结果
求助：扩增曲线不平滑，请QPCR高手帮助分析结果！ [转自 丁香园论坛]
做的是DNA的功能基因绝对定量PCR，ABI7500，25ul体系，Takara的试剂盒。标准曲线和扩增曲线还可以，溶解曲线有杂峰，电泳图也显示样品中有非特异性扩增，见下图。有以下问题请高手帮助解决：
1、扩增曲线为什么不平滑，而且纵轴值较低，是为什么？是不是跟我用的体系为25ul，所以荧光信号比较低有关？
2、标准曲线中有个别值很低或者很高，使R2值较低，但是如果去掉这几个点，得到的标准曲线回归性很好（R2>0.99）。设置重复是为了消除系统误差，理论上是不能够去掉这几个“不好”的点的，但是加样误差确实很难去除，保留这几个点是标准曲线不可用。请问各位高手，去掉几个点的标准曲线是否可用，是否能被编辑接受？
3、由于样品较复杂，虽然在常规PCR中没有发现有非特异性的扩增，但是QPCR后电泳还是有杂带，这一点在溶解曲线上也体现出来。能否通过设置读板温度将其区分出来？而不用提高退火温度或进一步优化体系？
再请问熟悉ABI7500仪器的高手两个问题：
1、PCR抑制剂的存在实验，我是将一个标准品放入一个样品中进行反应，那么结果应该怎么分析？是应该根据该标准品和该样品两个单独反应的结果与共同反应的结果进行比较么？
2、我是在延伸一步进行读板的，如果要在其它温度进行读板，该怎么设置？
问题好像比较多，请高手来帮帮忙啊！
