【讨论帖】MTT法和CCK－8法，哪个好？

最新回复

• ero11 (2015-9-12 16:01:43)

  
  请教：CCK-8是什么玩意儿？

• youyou99 (2015-9-12 16:02:03)

  
  最近在做这方面的实验，查了一些资料，希望可以对楼主有所帮助。
  Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
  Ø WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
  Ø WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以 省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更稳定， 使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。
  该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
  总之，CCK-8的原理跟MTT其实是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT；对细胞毒性小；为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
  但是CCK-8比MTT的价格要贵不少，所以一般来说，还是MTT法用的多。

• vcve (2015-9-12 16:02:24)

  
  同仁化学有CCK-8 不过还是MTT便宜啊

• zzzz (2015-9-12 16:02:52)

  CCK-8做细胞毒性实验，就很方便，加了CCK-8之后，过1-4小时后就可以直接读数，MTT加了之后，继续培养4小时，还要加DMSO溶解。CCK-8是MTT的优化版，都可以用。所测的结果是一致的。

• txwuyan (2015-9-12 16:32:07)

  
  提供公司的网页给大家参考：http://www.dojindo.cn/productd.asp?pd=82
  我也是做MTT屡受挫折，准备改用其他方法，也关注过CCK-8，不过后来定了罗氏的LDH试剂盒，晶美代理的，3800多啊，心疼中！

• 8s5g (2015-9-12 16:35:34)

  定过PROMEGA的LDH，现在可能要1800，也比较贵，不过可以做10块板，稳定性稍稍比MTT好一些。罗氏的是不是比较好，价格这么贵？

• pou (2015-9-12 16:37:58)

  
  cck-8比mtt操作起来更方面，对于毒性测试，cck-8比mtt好很多，因为cck-8不破坏细胞，所以不影响实验。
  悬浮细胞，操作时不需要离心，也就不会带走细胞

• xevin (2015-9-12 16:38:53)

  
  不知道cck-8 有没有便宜一些，看到上海的一个公司，一个板需要300多，有点太奢侈

• xevin (2015-9-12 16:39:51)

  这个以前讨论过的。
  MTT：步骤有点烦琐，中间有吸液的步骤会造成不可避免发误差，特别是加DMOS前的一步，会吸走不少的结晶，后来改进了方法，用2%SDS-HCL溶结晶，不需要去培养基，但是必须37度过夜，耗时比较长。另外MTT反应，这一步，至少需要3小时，如果要做某个药物的急性作用，用这个方法就不太好了。
  CCK-8：是MTT的改进，步骤简单，中间不需要吸出孔内的培养基，这样就减小了误差，另外CCK-8反应时间也短，最短1个小时就够了，特别适合做急性作用。还有CCK-8对细胞生长没有影响，测完细胞活性后，去掉含CCK-8的培养基，用新鲜培养基可以继续培养，并且还可以继续做其它指标的检测。MTT就不能。

• S6044 (2015-9-12 16:40:12)

  我也用的是上海同人的,确实有点贵.但效果很好,每次检测标准曲线都比较一致.但上周课题讨论,一个师兄建议要优化我培养细胞的显色时间.所以用的更多.不知道有人做过没有.我培养的是小胶质细胞.

• 水母 (2015-9-12 16:40:47)

  你说的那个1块板300多的有没有搞错啊，我用同仁的10块板才1200啊，还比你说的LDH便宜。

• dior (2015-9-12 16:41:07)

  个人认为MTT做贴壁细胞还勉强可以,CCK-8比较适合于做悬浮细胞,不需要离心机了

• 49888 (2015-9-12 16:45:25)

  相关疾病：
  药疹
  
  cck-8觉得做药物毒性比mtt要好，毕竟对细胞没有杀伤。cck-8虽然贵，但是能得到好的结果，也值得了，毕竟我们研究生时间而是有限啊。呵呵

• nn255 (2015-9-12 16:46:25)

  
  说实在的.我一直在寻找细胞增殖实验的新方法,因为有的方法,虽然被国际上认可,但毕竟要考虑到仪器设备及技术能力而不能行,最经典的MTT实验虽然价廉当然效果也可以,但毕竟太老了,我们实验室有个人用MTT方法发IF5分的杂志,其中被拒稿的原因之一就是方法太老.
  上海同仁的cck-8方法简便有效,比mtt操作起来更方面，比mtt好很多，不破坏细胞，不影响其他实验,而且被国际上认可,贴一个近年来用此方法发的IF大于10的文献目录,希望对大家有帮助.

• redbutterfly (2015-9-12 16:47:37)

  
  相关疾病：
  头痛
  
  我的实验涉及淋巴细胞增殖和细胞毒性杀伤部分用的是CCK-8，我感觉CCK-8显色稳定，重复性好，检测数值在做统计学处理时不会让人头痛。

• dior (2015-9-12 16:47:59)

  
  我最近做了MTT也做了CCK8，感觉cck8虽然是贵了点，但是操作起来要方便的多，而且数据看起来比MTT的要好些，但是有种比CCK8性价比更好的alarm blue价格比CCK8便宜的多，国外用的比较普遍，操作起来也比较方便，发文章也不像MTT受限制,说明书上说要继续培养4－6小时，但是我们实验室有做的加试剂1－2小时也 可以测，具体时间自己可以摸索一下，效果比CCK-8还要好，强烈推荐！！

• 3.14 (2015-9-12 16:48:21)

  
  楼上的说得不敢苟同，alarm blue价格你可以问一下比CCk-8贵的多,
  同样我最近也做了MTT及同仁的CCK-8，由于后者的性价比高，操作简便，不损伤细胞，其细胞可用于其他实验如用培养液冲洗后，可消化下来做免疫组化，没有影响，我对比过，而且价格也不算太贵，所以我推荐CCK-8

• dog002 (2015-9-12 16:49:25)

  
  MTT分析发的步骤比较多也比较繁琐，比如MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好。
  MTT形成的结晶用普通的DMSO溶解 ，我们做的过程中遇到了麻烦：
  1： 去上清后加入100ul的DMSO, 感觉不能很好的完全溶解
  2：每次做的结果有很大差异，不稳定，和镜下观察的结果也不一致。不知道该相信哪一次的结果。
  3：我的师妹做三氧化二砷诱导HEPG2和7721细胞凋亡的实验，用MTT听说没有得到理想的结果，后来又听她说用那个CCK-8试剂合做了，结果还是比较好的。后来老板就让我们淘汰了MTT,改用CCK-8了。
  其实大家也可以亲自做个比较就知道那个好了。

• bs4665 (2015-9-12 16:50:05)

  
  CCK-8试剂使用较简便，实验结果较稳定；MTT太繁琐，结果不太稳定。CCK-8价格稍贵，不过对一般实验室还可承受。

• vvmmoy (2015-9-12 16:50:33)

  
  有没有人用过 碧云天 的cck－8试剂盒，从网上看到他们的比同仁的便宜点，但不知道效果一样吗？？有经验的战友说一下
  http://www.beyotime.com/c0038.htm#introduction