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标题:【求助】血液中提取总RNA

盼盼[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 =菓子= 于 2016-4-8 14:53 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
外界环境中有许多RNA酶,血液中更多,所以您必须先检查您RNA的效果,只要看1,是否有拖带,2,看条带是否清晰。然后在反转,不然好可惜

师姐的意思的临床上的标本很珍贵,为了节省标本的损耗,建议我们不跑RNA...
前辈,有没有自己做过的提取骨髓血或外周血中总RNA的方法提供参考呢?
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盼盼[使用道具]
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1 不建议跑电泳,即使电泳了,也未必看到得到,因为全血提取的RNA量很少,替代方法,可以试用RT-PCR验证
2 红细胞裂解液中的成分会影响得率
3 可以将100ul骨髓加1mltrizol直接混匀后保存于-20度提取,效果不错,可以一试

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有没有什么方法可以尽量减少红细胞裂解液对得率的影响呢?
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盼盼[使用道具]
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有没有哪位前辈有自己提取过骨髓血或外周血中总RNA,能否将您的方法供给我参考一下呢?
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33号[使用道具]
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师姐的意思的临床上的标本很珍贵,为了节省标本的损耗,建议我们不跑RNA...
前辈,有没有自己做过的提取骨髓血或外周血中总RNA的方法提供参考呢?
当时我们提取的是外周血的总RNA,感觉提取的质量要比组织的RNA还要差一些。所以我才建议你第一次提的时候跑RNA
既然标本这么珍贵,为何不用非标本血液提下RNA练习下基本技术呢
如果之前你们师姐按这种方法已经成功提取过RNA并扩增,这就没问题

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但是如果仅仅停留在理论阶段,建议还是试试
不然实验不顺利,根本不知道哪个环节出了问题
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轰轰[使用道具]
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有没有哪位前辈有自己提取过骨髓血或外周血中总RNA,能否将您的方法供给我参考一下呢?
我们经常提取的,我上面描述的方法比较可靠的,全血最多加150ul/1ml Trizol,不必裂解红细胞
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vcve[使用道具]
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我们经常提取的,我上面描述的方法比较可靠的,全血最多加150ul/1ml Trizol,不必裂解红细胞

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赞成!!Trizol说明书上明明白白写着可以这么操作的,方法简单可靠,但是那个Trizol要注意了,其具体型号是Trizol LS Reagent,专门用来处理液体样本的,这种方法尤其适用于小体积样本,方法越简单越好,出错的机会越少。
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少林弟子[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 vcve 于 2016-4-8 15:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我们经常提取的,我上面描述的方法比较可靠的,全血最多加150ul/1ml Trizol,不必裂解红细胞

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赞成!!T ...

Trizol LS Reagent优势在哪里?用过国内的,差不多
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any333[使用道具]
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Trizol LS Reagent其实成分和Trizol Reagent是一样的,只是因为处理的是液体样本,所以把Trizol的成分浓缩了一下,这个Trizol LS Reagent优势就在于这是一种大品牌,国际通用哈哈,很多人都用,国内的试剂可能效果也差不多,只不过总给人一种不可靠的感觉。
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137****2843[使用道具]
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像天根、百代的试剂盒都挺好用的,一般RNA容易降解,跑PCR是没问题的。
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