【讨论帖】cDNA文库构建 SOS

最新回复

• 9900 (2016-4-09 09:51:07)

  
  我也想做文库，目前准备用CloneMiner cDNA Library Construction Kit。多多交流噢。。。

• PCR (2016-4-09 09:51:29)

  QUOTE:

  原帖由 9900 于 2016-4-9 09:51 发表
  
  我也想做文库，目前准备用CloneMiner cDNA Library Construction Kit。多多交流噢。。。

  太好了，找到同志了，可惜试剂盒有些不同，目前实验没有什么进展，暂时在歇气，等细胞长好后重整旗鼓，直到弹尽粮决

• 9900 (2016-4-09 09:52:17)

  太好了。又有这么多同志，以后多多交流。我也用这个试剂盒。我的emails是rufengleng@yahoo.com.cn各位的呢？

• 9900 (2016-4-09 09:52:42)

  大家看看推荐一下内容中的试剂盒：
  http://www.biocompare.com/molbio.asp?catid=123

• PCR (2016-4-09 09:53:03)

  SMART cDNA Library Construction Kit
  List Price Inquire
  Catalog Number K1051-1
  Size 1 Kit
  我用的这个，但不知道结果会如何

• daod (2016-4-09 09:53:18)

  
  我是从组织中提取mRNA的。以上几位是提取细胞的吧？

• PCR (2016-4-09 09:53:38)

  
  我就是用的总RNA，来自细胞

• 椰子叶子 (2016-4-09 09:53:55)

  我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢。

• PCR (2016-4-09 09:54:16)

  QUOTE:

  原帖由 椰子叶子 于 2016-4-9 09:53 发表
  我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢。

  和你的问题一样，所以过柱后就看不到了，准备重做。等有满意的结果再传吧。

• 椰子叶子 (2016-4-09 09:54:32)

  好的。谢谢。看来我还是不要急着过柱的好。因为我们三个人用一个试剂盒。你问道有别的柱子可替代的了吗？

• wiwi (2016-4-09 09:54:54)

  我也是用总RNA，从组织中提的。xib99可以把你的dscDNA电泳图上传吗？我做的一直都不是很好，smear长度还可以，只是亮度不够。不知怎么回事。谢谢
  smear长度还可以，只是亮度不够,如果这样的话
  应该增加LDPCR的循环次数，可以增加2-3个循环
  说明书上的TROUBSHOOTING上写的很清楚
  应该根据你的RNA起始量来决定循环数

• PCR (2016-4-09 09:55:09)

  
  欢迎novelfunction加入讨论，我试过最大26循环，但是还是不太理想。请问你做到哪一步，过柱有什么技巧吗？谢谢！

• 椰子叶子 (2016-4-09 09:55:28)

  我目前已经试到28个循环了，而且总RNA的量也加大了，但是结果还是很不理想。请教novelfunction，这样是否还要增加循环？还有就是和xib99一样的问题，谢谢。

• wanglaoshi (2016-4-09 09:55:47)

  
  别着急!仔细阅读说明书，能做出来的。我比你幸运，分级分离第一次就做出来了。仔细检查下自己的操作，反应条件，所加试剂。看看哪里出错了，柱子你可以在clontench的代理经销的地方买到。但是我觉得一个试剂盒做两个文库足够了。下次你一定成功的。

• INK (2016-4-09 09:56:29)

  请教一下，分级回收后连接载体，最后检测到的片段大小与你的分级回收到的大小一致吗？我碰到一个郁闷的问题，回收完后连接载体，最后检测到的都偏小，文库的质量不合格，正在郁闷之中，请各位大虾多多帮忙啊！谢谢谢谢