分析测试百科

标题: 可以用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白吗？ [打印本页]

作者: 青青子衿 时间: 2013-6-22 16:19 标题: 可以用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白吗？

我用水提取的蛋白、碱提取的蛋白、盐提取的蛋白冷冻干燥后的粉末，是不是要再用提取时用的溶剂把它们重新溶解然后才能用福林法测蛋白质含量，还是说用磷酸盐缓冲液溶解这三种蛋白（我想是前者，大家说呢）？

作者: 兜兜 时间: 2013-6-22 16:20

我做过类似的试验，之前沉淀是用蛋白质等电点来做吧?沉淀出来最后用元提取剂溶解再测定就好

作者: mr.henry 时间: 2013-6-22 16:24

可以咨询下你用盐提取蛋白质的具体放方法吗，我最近在做这方面的实验，却找不到哪里出了问题，提取不到蛋白

作者: 娜爷~ 时间: 2013-6-22 16:29

白鲢中的盐溶性蛋白，提取条件为：Nacl 0.5mol/L,PH 6.0,提取时间为24h，温度 0--4度，最后做过单因素实验，只在盐浓度0.3摩尔每升才有，而且超低，为0.6%多……

作者: 小书虫 时间: 2013-6-22 16:33

4倍体积的0.1mol/L，PH 7.4的PB(含1.1mol/L的NaCl), 匀浆1min，4℃抽提18h（不时搅拌）10000r / min,20min,4℃离心
这是我的方法，要提18h

作者: outeer 时间: 2013-6-22 16:37

反正做实验的时候就发现，基本相同实验步骤，实际做的却和人家参考文献差别很大……问一小白的问题：PB，是什么东东？，匀浆的时候转速没要求吧，谢谢了啦

作者: 冰@舟 时间: 2013-6-22 16:41

PB是磷酸盐缓冲液，那你提取的时候PH设为多少，像你之前做的小虾和对虾的蛋白质溶液本身PH应该是酸性，那就是应该在碱性环境中提取效果较好，对吧

作者: XXXX111 时间: 2013-6-22 16:48

温度0-4度，干吗选这么低的温度，保持蛋白活性？

作者: 差不多先生 时间: 2013-6-22 16:52

那干吗不稳定高一点直接让蛋白酶变性掉，而且温度高一些提取也更快

作者: 孤独的渔夫 时间: 2013-6-22 16:56

之前没考虑过，温度低提取时间长一些就行，再说还抑制微生物……我们要接下来研究盐溶蛋白的功能特性，并开发产品，不能失活，你也在做类似的实验吗，有什么好的方法，交流一下

作者: Kiwi2021 时间: 2022-8-12 10:48

那干吗不稳定高一点直接让蛋白酶变性掉，而且温度高一些提取也更快
https://1687660.com/view/jisusaiche/pk10kai.html

作者: Kiwi2021 时间: 2022-8-12 10:49

反正做实验的时候就发现，基本相同实验步骤，实际做的却和人家参考文献差别很大……问一小白的问题：PB，是什么东东？，匀浆的时候转速没要求吧，谢谢了啦 https://1687660.com/view/uklotto8/klsf_index.html

作者: chenzhen2016 时间: 2023-6-8 14:29

最近，楼主计划使用大肠杆菌表达体系来表达包涵体蛋白，以用于实验动物免疫并获取相应的多克隆抗体。然而，包涵体蛋白的复性是一个既需要策略又依赖经验的复杂过程。楼主之前尝试过对两个变性蛋白进行复性，但复性效果不佳，导致实验动物免疫后产生的抗体含量较低。因此，楼主希望能够从各位高手那里获取一些较好的复性方法和经验，以提高复性效果。本报告将讨论一些常用的包涵体蛋白复性方法和经验，希望能对楼主的研究工作有所帮助。

一、<a href="baidu.com">优化表达条件：</a>
温度：在表达包涵体蛋白的过程中，温度是一个关键因素。尝试不同温度条件，通常在室温、16°C、25°C、37°C等温度下表达，并评估包涵体蛋白的复性效果。

大肠杆菌菌株选择：不同大肠杆菌菌株对包涵体蛋白的表达和复性可能有所影响。尝试使用不同的菌株，如BL21(DE3)、Rosetta(DE3)等，并比较其对包涵体蛋白复性的影响。

增强蛋白折叠的辅助表达系统：一些表达辅助体系，如chaperone蛋白、折叠辅助剂等，可以增强包涵体蛋白的折叠和复性效率。考虑引入这些辅助表达系统，以提高复性效果。

二、变性和缓冲条件优化：

变性条件优化：在变性蛋白的复性过程中，变性剂的选择和浓度是非常重要的。常用的变性剂包括尿素、胍和SDS等。尝试不同的变性剂和浓度组合，以找到最适合的复性条件。

缓冲条件优化：适当的缓冲条件对于包涵体蛋白复性也至关重要。考虑使用不同pH值的缓冲液，并添加合适浓度的盐类（如NaCl、KCl），以提供最

作者: lililala6868 时间: 2023-7-20 14:42 标题: nice

不错的

168快乐8
体彩排列5开奖
今日福彩双色球

作者: chenzhen2016 时间: 2023-7-23 14:45

在一般情况下，可以使用磷酸盐缓冲液溶解蛋白质样品，以便进行福林法等测定蛋白质含量的实验。磷酸盐缓冲液是一种常用的溶液，可以帮助保持蛋白质在适当的pH范围内稳定溶解，而且对于大部分蛋白质来说是非变性的，有利于后续的测定。

对于你提到的用水、碱或盐提取的蛋白质，通常在冷冻干燥后，可以使用适当的磷酸盐缓冲液进行再溶解。使用提取时用的溶剂进行重新溶解是常见的方法，但如果提取时的溶剂不适合福林法测定蛋白质含量，建议在重新溶解时选择合适的磷酸盐缓冲液。

具体选择何种磷酸盐缓冲液（如pH值和浓度等）取决于你的实验要求和蛋白质样品的性质。在进行实验之前，建议查阅相关文献或进行一些实验前的优化试验，以确定最适合你实验的磷酸盐缓冲液条件。

总之，磷酸盐缓冲液通常是一种较好的选择来溶解蛋白质样品，并用于福林法等测定蛋白质含量的实验。但具体情况还需要根据实验要求和样品特性来确定最合适的处理方法。

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)