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标题: 为什么做的三个平行测得的值相差很大？ [打印本页]

作者: 我是夜猫子 时间: 2013-6-23 11:08 标题: 为什么做的三个平行测得的值相差很大？

考马斯亮蓝法测蛋白质含量时，做标准曲线，为什么做的三个平行测得的值相差很大，本人加的试剂都一样，求解

作者: 倾尽温柔 时间: 2013-6-23 11:08

看看平行对照操作做的好不好咯，
或者分光光度计没有校准好不够稳定

作者: 舞疯 时间: 2013-6-23 11:12

第一，注意在加样的条件的时候，外部条件一样。第二，比色之前要调节分光光度计调零和校准。第三，溶液转入比色皿的之前注意一定要离心澄清并且加样时候润洗之类的。

作者: 翔少爷 时间: 2013-6-23 11:15

有可能是分光光度计是不是不好使了，测样时不稳定了吧。
还有可能是你做标样的操作不标准，要不不可能差别很大的。

作者: 小米粒 时间: 2013-6-23 11:18

可能是比色皿的问题，我之前测也出现过这种情况，你最后都调零试试，差别大的剔除不要

作者: Kiwi2021 时间: 2022-9-19 10:49

把胶浓度上调到15%，跑的电压不要太高，浓缩胶30V，分离胶80V。你用的电压多少？ https://1687660.com/view/sgAirship/pk10kai.html

作者: chenzhen2016 时间: 2023-7-26 16:52

如果在考马斯亮蓝法测蛋白质含量时，做三个平行样品的测量值相差很大，可能存在以下几个可能的原因：

1. 实验操作不稳定：在进行实验时，操作的精度和稳定性对结果影响较大。比如在加样品、试剂或读取吸光度时出现误差，都会导致测量结果的差异。

2. 反应时间不一致：考马斯亮蓝法是一种颜色反应法，吸光度的测量需要一定的反应时间来确保反应充分。如果三个平行样品的反应时间不一致，就会导致测量结果的差异。

3. 样品制备不均匀：样品制备过程中可能存在不均匀混合或沉淀现象，导致取样时测得的含量不一致。

4. 试剂质量差异：尽管你认为加入的试剂都一样，但有时试剂可能存在批次差异或质量问题，导致实验结果不一致。

为了减少这些影响，可以采取以下措施：

  *确保实验操作准确、稳定，尽量保持操作的一致性。
  *使用新鲜制备的试剂，并确保试剂的质量良好。
  *确保样品的制备均匀，避免混合不均或沉淀现象。
  *确保各个平行样品在反应时间上一致，可以在一定的时间范围内同时测量吸光度，确保反应充分。
如果尽管以上措施采取了，仍然存在较大的差异，可能需要重新考虑实验的步骤和条件，或者尝试其他蛋白质测量方法。另外，可以考虑增加重复次数，以提高实验的可靠性和准确性。

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