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标题: 分享：十步优化液相色谱！！ [打印本页]

作者: dragon5 时间: 2010-3-15 14:14 标题: 分享：十步优化液相色谱！！

　高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography，HPLC)是7O年代以后发展最快的分析手段，从最初的少数科研部门掌握到现在的普通生产、实验室等大规模应用，HPLC 作为质量控制，分析化验和有效分离的技术在科研和生产中发挥了越来越重要的作用。HPLC的原理与普通液相色谱是相同的，都是根据待分析的混合样品中各个组分在流动相和固定相(即色谱柱)中的分配系数不同来达到分离的目的。

　　虽然作为一种简单的技术，HPLC仍然存在着可能出错的地方，比如说压力混乱、管道阻塞、和层析柱不能永远使用等问题。以下来自著名科学仪器设备制造公司Waters Corp和LC Resources的专家提出的几点HPLC优化建议。

　　1. 了解你要用的缓冲液

　　“人们总是为了对相同的处方做出了不同的解释而给我支付昂贵的咨询费。”

　　——LC Resources总裁Tom Jupille

　　HPLC依赖于分析物之间的微分均衡，固定相(填料),和流动相(溶剂)。常规的流动相一般由50%的乙腈加上50%，10 mM，pH2.5的磷酸钾缓冲液组成，至少有四种混合它们的方法：正确法、容易法、错误法和笨方法。

　　正确的方法应该是：按照正确的比例混合10 mM的磷酸和10 mM的磷酸二氢钾达到pH 2.5。然后混与等体积的乙腈混合。这个过程需要生成标准的操作流程，明确标定缓冲液的配方和有效期等。

　　2.每天更换缓冲液

　　水流动相有可能被细菌，模具和样品残留污染，这些污染的出现可能会升高系统的压力和提高检测仪的检测背景，当然当装流动相的瓶子底部出现混浊的时候可以很明显的发现这些污染，但是当这些污染以薄膜的形式存在于瓶底或者瓶壁则不容易发现。因此要不每天更换操作的缓冲液，要不确保层析方法中包含10%-15%的有机溶剂，减少污染。

　　3 .防止不合格样品进入层析柱

　　“尽最大可能使不合格的样品远离层析柱”

　　——Fred Hutchinson Cancer Research Center的蛋白质组主管 Jupille. Philip Gafken

　　要分离的样品一定不能对层析柱产生伤害，研究人员在进行分离之前需要考虑像：盐是否会沉淀?去垢剂是否会包被或者损害填料等等这样的问题，而且专家也建议将单纯的蛋白沉淀步骤(从血浆中分离分析物的通用方法)转换为固相或者液相提取。比如说，如果你想寻求有机药物代谢物，你可以将样品与有机溶剂混匀使所想要的化合物进入溶剂中，而将大量的杂质留在水相中。

　　4.使用保护柱

　　保护柱或者预柱是指置于主分析柱前的一根短(0.5-2 cm)，相对便宜的柱子。花大概80到400元购置这样一根保护柱可以明显地延长昂贵的分析柱的寿命。有研究人员在正常的环境下进行了对比实验，结果发现一根柱子可以进行1， 000-2，000次填注，而安置了保护柱之后，柱子可以进行10，000次的填注之后仍未出现轻微的改变。而且保护柱的填料也应该周期性的改变，大约每 200-500次填注后更换一次——假如样品较脏则应该更频繁更换。

　　5，不要让填料保存在水缓冲液中

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作者: uwku58h 时间: 2010-3-15 14:26

学习学习,把没做到的做到.

作者: huihuidetian112 时间: 2010-3-15 15:06

很多时候不是不知道，就是懒，多谢这位大侠提醒。

作者: fqdfi32 时间: 2010-3-15 15:08

其实做过了一段时间也都明白这道理，就是有些小细节有时候一忙起来就容易忽略！多谢提醒啊！

作者: entd_jps 时间: 2010-3-15 15:10

多谢受教了，关键还是不能偷懒。呵呵

作者: LUMGR 时间: 2010-3-15 15:11

基本上都可以做到，日常维护最重要。。

作者: ees人生无奈 时间: 2010-3-15 16:51

谢谢分享！学习！

作者: lfm20091102 时间: 2010-3-16 09:54

多谢分享

作者: bgwaste 时间: 2010-3-16 17:00

小中大非常感谢，学了不少。

作者: lfm20091102 时间: 2010-3-16 21:17

:) :) :)

作者: dsh080808 时间: 2010-3-17 20:14

:) :)

作者: ylylttt 时间: 2010-4-1 14:42

基本上都可以做到，日常维护最重要。。

作者: eveme 时间: 2010-4-25 20:47

学习学习,把没做到的做到

作者: nuanyangyang 时间: 2010-5-2 03:12

受教了，非常感谢。呵呵

作者: wy82 时间: 2010-6-23 23:30 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

作者: 维拉2010 时间: 2010-7-7 11:32

作者: renfuliang 时间: 2010-9-19 11:11 标题: hao

hao jyyuysddddsddd

作者: 莎莎 时间: 2010-10-6 16:15

谢谢分享，学习中

作者: LICKYGO 时间: 2010-10-12 21:51 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

作者: LICKYGO 时间: 2010-10-12 21:52 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

作者: colcoben 时间: 2011-2-26 19:51

多谢受教了，关键还是不能偷懒。呵呵

作者: cuitao0208 时间: 2011-3-10 12:58

主要还是懒，平时要养成好的习惯

作者: tina860421 时间: 2011-7-11 15:56

学习学习,把没做到的做到

作者: tanliu 时间: 2011-7-11 16:04

好好学习

作者: 蓝色蝴蝶 时间: 2011-8-3 12:20

学习学习，好多知识需要

作者: 54tianxin 时间: 2011-8-7 01:13 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

对此还不是很了解，学习学习，谢谢楼主分享

作者: 同窗归零 时间: 2011-10-6 22:52

向你学习！谢谢！

作者: 同窗归零 时间: 2011-10-6 22:52

向你学习！谢谢！

作者: 分析工 时间: 2011-10-10 09:21

作者: xiange 时间: 2011-10-11 23:38

谢谢楼分享

作者: raotao2 时间: 2011-10-12 11:24

看看高手说些啥

作者: zhl845 时间: 2011-10-13 10:09 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

作者: HDR 时间: 2012-4-1 15:32

值得学习的东西，谢谢楼主

作者: 听潮看月 时间: 2012-4-4 21:23

说得有道理，很有用处

作者: 山东兵 时间: 2012-4-13 16:15

作者: zy210505 时间: 2012-5-30 12:58

多谢分享

作者: zy210505 时间: 2012-5-30 12:59

多谢分享

作者: 隆冬雪 时间: 2012-7-16 11:38 标题: 好棒。谢谢

十分感谢。尤其对于我这种刚刚接触液相的菜鸟来说，更为受用。

作者: jordanlau 时间: 2013-8-26 16:05 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

都可以做到，日常维护重要！！

作者: Kobe24 时间: 2013-10-15 21:53 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

最近液相问题不少，到这取取经

作者: qizhen 时间: 2013-10-18 16:10 标题: 回复 #1 dragon5 的帖子

高手啊，对我很有用，谢谢

作者: NIU0520322 时间: 2014-2-28 10:38

总结的很好啊

作者: 晚风与日落吖 时间: 2024-3-11 16:31

谢谢分享，学习到不少东西

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