标题:
挑取了单菌落做菌保表达蛋白不行是怎么回事?
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作者:
哦买噶
时间:
2013-8-31 15:14
标题:
挑取了单菌落做菌保表达蛋白不行是怎么回事?
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我将质粒转入肠杆菌表达菌株,涂板,挑取了单菌落做菌保,表达蛋白,开始表达的很好,后来隔了一段时间(一个月左右)拿菌保出来做表达,无论是摇瓶还是上罐表达量都特别低,很费解。求高手指导
作者:
集贤阁
时间:
2013-8-31 15:16
这个是正常的,随着传代的增多质粒会慢慢丢失,菌种本身也会退化,哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选,类似于自然选育的工作,纯粹是体力活。
作者:
哈达
时间:
2013-8-31 15:21
楼上说的对,蛋白表达的菌株在-80℃放着也会退化,如果你隔了一段时间仍要大规模表达,最好把载体重新转一下表达菌株Bl21。
作者:
哈达
时间:
2013-8-31 15:33
重新转化。我试过把已有菌种重新涂板没有明显效果。菌种在-80度冻过之后,质粒表达会受到明显的影响,即使是只冻了几天。
做细菌蛋白纯化的话影响很明显,所以必须每次新转化的菌株做蛋白纯化,此条切记!
作者:
Kiwi2021
时间:
2022-9-19 09:59
这个是正常的,随着传代的增多质粒会慢慢丢失,菌种本身也会退化,哪怕是保藏的高表达菌株过段时间再用也会发生表达量降低。
需要你不停的活化挑单菌落筛选,类似于自然选育的工作,纯粹是体力活。
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