标题:
PMSF是抑制蛋白质降解的啊对吗?
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作者:
化小样
时间:
2013-8-31 15:53
标题:
PMSF是抑制蛋白质降解的啊对吗?
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请教各位大神们,PMSF溶解在丙三醇中,在最终的蛋白质提取缓冲液中PMSF浓度为1mmol/L,对所提的蛋白质有没有影响啊?
我最开始做实验时用到的浓度为微摩尔级,当时是溶于水中,跑非变性胶考染还有条带;后来加到1mmol/L,溶于丙三醇中,跑非变性胶考染竟然没有条带了,按理说,PMSF是抑制蛋白质降解的啊,对于这个结果,百思不得其解啊!
期待大家的回复帮助!
作者:
明灰灰
时间:
2013-8-31 15:53
在我的实验里,PMSF在较低浓度时不影响两个酶的水解活性,只是随着浓度提高,对酶的水解活性抑制效果越大,也可能是能够使蛋白质发生不可逆变性,或者甚至是降解。你看看我的计算,我的称量应该是正确的。由此可见,可能是你的实验情况特殊,你的蛋白质比我的两个酶脆弱得太多,也可能是你的哪一步操作出错,比如说PMSF失效,或者那个浓度还不足以抑制蛋白酶,或者加了PMSF之后还放置过久等,但不可能猜得出具体是什么原因造成的。如果是你的蛋白质有什么活性的,建议你就测一下看看那个活性有没有减弱,再看看什么步骤出问题。
作者:
誓言@谎言
时间:
2013-8-31 15:56
PMSF是抑制丝氨酸蛋白酶活性,但不会降解蛋白,所以你蛋白条带的消失绝对不可能是由于PMSF的加入引起,相反,由于PMSF在水中很不稳定,如果你不是每步都加入新鲜的话反而容易导致你的蛋白降解!Good luck!
作者:
甜甜TVT
时间:
2013-9-1 11:21
你提的蛋白是动物蛋白还是植物蛋白?PMSF抑制酶的活性比较综合,我一般都是溶在甲醇里面,然后再加放适当比例的胰蛋白酶抑制剂和胃蛋白酶抑制剂(环境中这两种酶较容易污染)
作者:
mico_11
时间:
2013-9-1 11:27
我的酶都是纯化后的纯酶,没有加过蛋白酶抑制剂,放两个月没问题。可能是你的酶不纯。
作者:
Kiwi2021
时间:
2022-9-12 11:00
你提的蛋白是动物蛋白还是植物蛋白?PMSF抑制酶的活性比较综合,我一般都是溶在甲醇里面,然后再加放适当比例的胰蛋白酶抑制剂和胃蛋白酶抑制剂
https://1687660.com/view/uklotto8/klsf_index.html
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