分析测试百科

标题: 分享：样品分析之色谱柱方法开发（附图谱） [打印本页]

作者: HEC_css 时间: 2010-5-25 10:40 标题: 分享：样品分析之色谱柱方法开发（附图谱）

领导安排检测一个业务单位送来一个样品让我们帮忙调试方法，样品名称为对羟基苯甲醛，分子式见下图，样品为类白色粉末。

首先查找相关信息：对羟基苯甲醛熔点113-118℃，相对密度1.129（30/4℃）。广泛用于医药、香料、农药、石油化工、电镀等领域.在医药工业中,主要用合成羟氨苄青霉素(阿莫西林)、抗菌增效剂甲甲氧苄胺嘧啶(TMP)、3,4,5-三甲氧基甲醛、对羟基苯酐氨酸、羟氨苄头孢霉素、人造天麻、杜鹃素、艾司洛尔等；在香料工业中用于合成香兰素、乙基香兰素、洋茉莉醛、丁香醛、茴香醛和覆盆子酮等香料;在农药中主要用作除草剂溴苯腈和羟敌草腈的合成;在化工中主要用于合成对羟基苯甲酸、对羟基甲酸苄酯、醋酸对羟基苯酚酯；在国外还用于生产杀菌剂、照相乳化剂、镀镍光泽剂、液晶等。

同时查找相关分析方法，文献中有气相色谱分析和液相色谱分析两种。本着方便的原因，首先考虑气相色谱分析，样品处理方便。文献中介绍用DB-5；30m*0.32mm*0.25um或者类似规格色谱柱，我们身边有一款30m*0.25mm*0.25um的色谱柱，先来试试吧。柱温在120度-200度程序升温，升温速率8度/分钟。样品先用乙醇溶解后按照文献方法分析，效果不是理想，同时调整温度和速率还是不行，因时间问题只能放弃，转而考虑液相色谱分析，将此情况向业务单位反映，同时需求他们有没有可行的方法。

业务单位提供了一个简单的分析条件，一看是液相色谱分析，与我们的想法不谋而合。分析条件：色谱柱：C18不锈钢色谱柱，流动相为甲醇和0.1%三乙胺水溶液，比例为40:60，检测波长为225nm，样品处理为甲醇溶解样品，流速1.0ml/min。

有现成的方法就比较好办了，首先依葫芦画瓢，按照以上方法处理一个样品分析一下，手边有月旭公司和其他厂家的进口的色谱柱，首先用月旭公司的色谱柱调试一下，如果不行还可以请教月旭公司的工程师，呵呵，以下是分析谱图：

从谱图上看样品有的后延，泵压达到190帕。

将流动相适当调整一下，减少甲醇的比例：

这是调整后的谱图：

效果不是很理想，看看保留时间比较长，泵压也比较高，也达到171帕，看来调整甲醇是不能彻底改变泵压偏高的问题了，将甲醇换成乙腈试试。流动相改为0.1%三乙胺：乙腈=60:40，流速1.0ml/min，系统平衡好后发现泵压降到了105帕，看来有门，上一张谱图看看：

作者: HEC_css 时间: 2010-5-25 10:43

峰型有了明显的改善，变窄了，拖尾现象也没有了。但是主峰后面的后杂有点分离不好，再试试调整调整是否有更适合的。将乙腈的比例调整到30，其余条件不变。

组分的分离效果是达到了，但分析时间也变长了，这次流动相不变，调整流速，在主流分出来后，将流速调整到1.4ml/min，这是调整后的谱图。

这次感觉比较适合，手边有其他厂家的色谱柱，是否有更合适的呢？

这是其中一根色谱柱的谱图：色谱柱为250mm*4.6mm*5um分析条件相同，主峰后的一个小杂峰没有分离出来。

这是另一根色谱柱分析后的谱图：

因时间比较紧，没有再进一步优化。从以上谱图看，分离效果都不尽如人意，不是分离效果不够就是分离时间太长，整体效果感觉不如月旭公司的色谱柱，但不代表其他公司的色谱柱质量不行或者分离度不好，就像大多版友所说得，这是样品对色谱柱的选择性，针对这个样品，可能月旭公司的色谱柱更适合。

谱图中谱图没有经过任何的处理，谱图处理不在这次方法调试工作中，具体的谱图处理是后期工作，这仅是确定一种可行的分析方法。

作者: dragon5 时间: 2010-5-25 10:55

很好，很强大，谢谢分享！

作者: utek 时间: 2010-5-25 10:57

支持楼主，我收藏了。

作者: jeirf3uwd 时间: 2010-5-25 10:58

非常不错，学到很多知识！！

作者: eesa_dc_seein 时间: 2010-5-25 11:00

多谢楼主的分享！！！！

作者: renmr03 时间: 2010-5-25 11:02

收获很大，谢谢楼主。

作者: chongwenmen 时间: 2010-5-25 11:04

总结的很全面！

作者: zhaohaimi 时间: 2010-5-25 11:06

感谢您的分享。学习下。

作者: michael_b_rex 时间: 2010-5-25 11:10

高手就是高手！！

作者: 山水 时间: 2010-5-25 20:30

很好的资料，楼主辛苦了！

作者: xiaomi816 时间: 2010-5-29 21:06 标题: 感谢你的奉献

楼主真是有心之人啊！！

欢迎光临分析测试百科 (http://bbs.antpedia.com/)