标题:
如何判断同一基因的两个不同突变位点在同一染色体上
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作者:
奇蒙kate
时间:
2013-12-20 13:10
标题:
如何判断同一基因的两个不同突变位点在同一染色体上
背景是人的某基因,上面有两个不同的突变位点,相隔较远,PCR无法一次扩增出来,因此无法通过TA克隆判断是否在同一条染色体上,还有没有其他方法能判断这两个突变位点,是在同一条染色体上?还是在不同的染色体上呢?
作者:
mybioon
时间:
2013-12-20 13:13
难道你的这个基因是基因家族里面的成员吗?如果不是的话一个基因就应该再一条染色体上吧!
作者:
mybioon
时间:
2013-12-20 13:14
可以将PCR产物和载体TA克隆后摇菌,挑单菌落测序 ,
如果2个突变点在同一条染色体上,则单菌落克隆测序的结果是会出现2个突变都有的和没有突变的
如果2个突变点不在同一条染色体上,则单菌落克隆测序的结果是会出现各有1个突变的
作者:
iii_ii
时间:
2013-12-20 13:15
一般情况还是要检测家系的其他成员,特别是父母双方的突变情况,若父母各携带一个突变,那么完全可以视为是位于两条染色体上。可能为该病的遗传病因,为combined mutation。如果家系成员完全不能找到,那么可是找一下突变位点附近有没有SNP位点,如果有,可将SNP位点与突变位点一起PCR扩增出来,通过TA克隆测序分析SNP,也许可以分析出是否在同一条染色体上。
作者:
奇蒙kate
时间:
2013-12-20 13:15
标题:
回复 #2 mybioon 的帖子
不是基因家族成员,是一个隐性致病基因。
现在测序结果是两个突变位点都是杂合状态,也就是说其中一个染色体上有碱基突变,但这两个位点的碱基突变分别在两个染色体上?还是在同一条染色体上?现在无法确定。但这影响到结果判断,如果分别在两条染色体上,那蛋白产物都是有缺陷的;如果在同一染色体上,还有一半蛋白产物是正常的。这是人的标本,无法通过经典的孟德尔规律杂交分析,也无父母的信息,即便是有父母的信息,也不敢保证子代两个突变位点之间不会发生交换。
那如何判断这个基因的两个不同突变位点在同一染色体上呢?
作者:
奇蒙kate
时间:
2013-12-20 13:16
标题:
回复 #3 mybioon 的帖子
两个位点相隔比较远(10k以上),单次扩增有点困难。
作者:
奇蒙kate
时间:
2013-12-20 13:17
标题:
回复 #4 iii_ii 的帖子
父母的标本真是不好得到啊。
SNP方法是个不错的建议,多谢!
我的序列很长,估计要分好几段进行扩增分析。
作者:
tewank
时间:
2013-12-20 13:18
前辈好~ 我也碰到了相同了问题,请问您后来具体怎么做的? 求助。。。
作者:
sunbent
时间:
2013-12-20 13:19
标题:
回复 #7 奇蒙kate 的帖子
父母的是效率最高的,不然兄弟姐妹,子女等等也可能有帮助
作者:
龙小好汉
时间:
2013-12-20 13:20
SNP也存在交换的可能,可尝试FISH或通过IP-MS/MS测蛋白序列
作者:
小小白xxb
时间:
2021-1-25 11:12
是否可以从宏观表现判断微观状态?
因为两个突变都是隐性突变,所以每个突变并不抑制等位基因的蛋白表达。如果两个突变集中在同源染色体的一条上,那么另外一条染色体的蛋白正常,就不会发病。如果两个突变分布于同源染色体的两条上,那么两条染色体的蛋白都不正常,就会发病。
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